口腔鳞癌DNL中检测造血干细胞的研究

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1、上海第二医科大学硕士学位论文口腔鳞癌DNL中检测造血干细胞的研究姓名：叶冬霞申请学位级别：硕士专业：口腔颌面外科指导教师：郭伟2003.5.1堂生墅遨型塑一一2缩略语表⋯————————————————————————————————————————～英文缩语英文全称中文全称KDKilodaltonDNLG，CSFHSCHSCTHLACDDNAmRNART．PCRTBSTBE0DDEPCDABbpⅡ{MOPSAMVOtigodTdNTPEBDraininglymphnodelymphocyteCol

2、onystimulatingfactor—granulocyteHematopoieticstemcellHematopoieticstemcelltransplantationHumanleukocyteantigensClusterofdi脏rentiationDeoxyribonucleicacidMessageribonucleicacidReversetranscription—PloymerasechainreactionTris．HClbu位rsalineTris／borateelec

3、trophoresis(buffer)OpticaldensityDiethylpyrocarbonateDiaminobenzidineBasepairImmunohistochemistry千道尔顿引流区淋巴结细胞粒细胞集落刺激因子造血干细胞造血干细胞移植人类白细胞抗原自细胞分化抗原脱氧核糖核酸信使核糖核酸逆转录多聚酶链反应三羟甲基氨基甲烷．盐酸缓冲生理盐水Tris／硼酸电泳缓冲液光密度焦碳酸=乙酯联苯二胺碱基对免疫组织化学3．m．morpholino)propanesulphonicacid3

4、-(N一吗啉代)乙磺酸AvianmyeloblastosisvirusAMV逆转录酶reversetranscriptase(禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶)Oligodeoxythymidylicacid寡聚脱氧胸苷酸Deoxynucleosidetriphosphate脱氧核苷三磷酸Ethidiumbromide溴化乙锭GVHDGraft．versus．hostdisease移植物抗宿主病⋯——_————_———————————⋯——。_—_——⋯上海笫二医利大学硕士毕业论文中文摘要目的头颈部恶性肿瘤

5、约占全身恶性肿瘤的5-IO％。其中El腔鳞癌在头颈部恶{生肿瘤中占有相当大的比例，可发生于各年龄和口腔各部位。目前，治疗口腔鳞癌的主要方法有：手术、放疗和化疗。化疗由于其提高癌症患者生存率、减少肿瘤转移与复发，逐渐被患者接受。但化疗也能产生不良反应，1984年Hryniuk等首次报道了化疗药剂量与疗效有相关性的临床观察结果。常规剂量化疗因瘤体内药物分布浓度过低和骨髓内、外毒性反应，严重限制了化疗在口腔肿瘤临床的应用和疗效。在晚期或转移性口腔恶性肿瘤的治疗中，上述问题更为突出。虽然大剂量化疗能增加瘤体

6、内的药物浓度，但会引起严重的骨髓内、外毒性反应。因此，迫切需要开辟一条新的治疗途径。随着科学的发展和造血干细胞的发现，临床应用超大剂量化疗已成为现实，并逐渐在血液性肿瘤和实体瘤方面广泛应用。目前有关造血干细胞的研究主要集中在骨髓、外周血和脐血，而有关淋巴结中是否存在造血干细胞的研究甚少。因此，本研究拟通过研究口腔鳞癌颈部淋巴结清扫的石蜡标本和DNL(draininglymphnodelymphocyte，引流区淋巴结细胞)，进行静态、动态和定性分析，从细胞和分子水平检测口腔鳞癌DNL中是否存在造血于

7、细胞。方法1首先对口腔鳞癌颈清石蜡标本进行免疫组化检测，观察是否有CD34抗原阳性细胞。2新鲜口腔鳞癌颈清标本，机械法处理后梯度离心，得到口腔鳞癌DNL细胞。将细胞制成涂片，免疫组化检测CD34抗原表达。3．提取DNL细胞总RNA后RT．PCR检测CD34mRNA的表达。Tca8113细胞系和骨髓细胞分别作为阴性和阳性对照。4取颈清标本和骨髓标本，分离得到DNL和单个核细胞，在粒细胞集落刺激因子(G，CSF)刺激下进行细胞培养，检测细胞集落形成。结果t9例颈清淋巴结石蜡标本中有14例CD34抗原免疫

8、组化染色呈阴性，其中5例可见弱阳性染色。体夕卜DNL细胞涂片CD34抗原免疫组化呈阴性染色，而骨髓涂片中可见大量阳性染色细胞。RT．PCR在DNL细胞中未扩增出CD34mKNA。DNL细胞和骨髓细胞经体外刺激培养后，表现出对G—CSF的不同反应性。骨E海第1二医科大学坝士毕业论文髓细胞形成细胞集落，集落较大，形态不规则，细胞数较多。而DNL细胞培养后形成细胞簇，且细胞数较少。结论1、头颈部恶性肿瘤颈清淋巴结中虽有CD34分子表达，但主要位于淋巴结内部的微血管内皮上。2