阿魏酸钠对反复前脑缺血再灌注大鼠海马及额叶胶质纤维酸性蛋白表达的影响

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1、阿魏酸钠对反复前脑缺血再灌注大鼠海马及额叶胶质纤维酸性蛋白表达的影响作者：满玉红李立森于挺敏【摘要】目的探讨内皮素（ET）受体拮抗剂阿魏酸钠对大鼠前脑缺血再灌注后海马和额叶胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法双侧颈总动脉夹闭法制备大鼠前脑缺血再灌注模型，HE染色观察阿魏酸钠治疗前后海马CA1区神经元形态学改变，免疫组化法检测缺血再灌注后2、4、6w海马和额叶胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果阿魏酸钠治疗组海马神经元缺失、变性、坏死较对照组轻，缺血再灌注后海马和额叶GFAP的表达随时间延长逐渐增多，阿魏酸钠治疗组GFAP的表达较假手术组多，较缺血再灌注组减少，差异显著（P<

2、0.05）。结论大鼠前脑缺血再灌注后GFAP表达增多，阿魏酸钠能够降低其表达，对脑缺血性损伤具有保护作用。【关键词】阿魏酸钠；脑缺血再灌注；胶质纤维酸性蛋白；星形胶质细胞；内皮素8胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是星形胶质细胞（AST）特有的细胞骨架蛋白。GFAP表达量能够代表AST功能状态。目前研究认为，脑缺血后AST中GFAP表达增加，早期可保护神经组织，晚期则促进胶质瘢痕形成，阻碍神经再生。内皮素（ET）是人体内一种生物活性多肽，具有强烈的缩血管作用，在活化的脑AST上存在ET受体，可能参与脑缺血损伤过程。研究证明阿魏酸钠具有拮抗血管ET受体、减轻血管内皮细胞损伤的作用，可促进脑缺血后神经

3、功能恢复及血管生成〔1〕，但是否能通过调节AST活性发挥对脑缺血的保护作用未见报道。本文旨在探讨阿魏酸钠对脑缺血后AST上调GFAP表达的影响，进一步阐明阿魏酸钠的脑缺血保护作用机制。　　1材料与方法　　1.1动物分组及前脑缺血再灌注模型制备　　雄性Wistar大鼠45只〔长春高新医学动物实验中心提供，动物合格证编号SCXK（吉）20032004〕，体重200～250g，随机分为3组：①假手术组，②缺血再灌注组(对照组)，③缺血再灌注阿魏酸钠治疗组(治疗组)，每组15只，各组按手术后2、4、6w再分为3个亚组，每亚组5只。。大鼠10%水合氯醛（100mg/kg）腹腔注射麻醉，仰卧位固定，颈

4、部正中切口，对照组和治疗组分离双侧颈总动脉，注意保护迷走神经，无创微动脉夹夹闭双侧颈总动脉15min，然后恢复血流再灌注60min，再夹闭15min，松开动脉夹，恢复血流，缝合切口。假手术组只分离双侧颈总动脉，不予夹闭，余同对照组。术中用红外线灯和保温垫使大鼠肛温保持在（36.0～37.0）℃。术后同等条件下正常饲养，分别于各时间点处死大鼠取脑标本。8　　1.2给药方法及剂量　　治疗组于动物清醒后24h内给予阿魏酸钠腹腔注射治疗，给药剂量依照如下换算公式：大鼠给药剂量（mg/kg）=6.25×人口服剂量（mg/kg），人静点阿魏酸钠剂量按400mg·60kg-1·d-1计算。每日腹腔注射1次

5、。1w后重新测量体重，调整给药剂量。对照组和假手术组给予等量的生理盐水腹腔注射。　　1.3标本采集和组织切片制备　　不同时间点，大鼠10%水合氯醛（100mg/kg）腹腔注射麻醉后经0.9%生理盐水250ml心内灌注冲洗，10%甲醛溶液前固定，取脑，4%多聚甲醛溶液后固定72h，常规脱水，透明，石蜡包埋，冠状切片，片厚4μm，分别行HE染色和GFAP免疫组化染色。　　1.4GFAP免疫组化检测（SP法）　　GFAP免疫组化试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供，按说明书操作。阴性对照用0.02mol/LPBS代替GFAP一抗，其余实验步骤不变。8　　1.5结果判定及统计学处理　　GFAP免

6、疫组化阳性结果判定：400倍光学显微镜下每张载玻片海马和额叶各计数3个视野，胞质呈棕黄色或棕褐色的细胞为GFAP阳性细胞。　　1.6统计学处理　　全部实验数据以x±s表示，组间比较采用方差分析和F检验，组内比较采用t检验。　　2结果　　2.1HE染色结果　　光镜下假手术组未见异常，神经元、胶质细胞结构完整，间质无水肿；对照组部分神经元及胶质细胞变性坏死，随时间延长胶质细胞逐渐增生，部分标本可见较多圆形或椭圆形肥胖型星形胶质细胞，胞质丰富，嗜伊红色，核小，致密并偏于一侧；治疗组脑组织肿胀及星形胶质细胞增生较轻。　　2.2GFAP免疫组化染色结果8　　阴性对照切片各部位均未见到免疫反应阳性细胞。

7、假手术组各时间点GFAP表达无明显差异。对照组海马和额叶GFAP表达在2、4、6w3个时间点呈持续增加。治疗组GFAP表达较假手术组高，较对照组低，差异显著（P<0.05）。见表1。表1前脑缺血再灌注不同时间点海马和额叶GFAP阳性AST数(略)　　3讨论GFAP在有活性的AST中表达相对较多，其表达量的多少可作为研究脑损伤后AST反应的标志，研究显示脑缺血再灌注后胶质细胞增生活化在全脑均较活跃，这种反