钝顶螺旋藻多糖抗病毒及抗肿瘤作用的研究

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1、中国海洋大学博士学位论文钝顶螺旋藻多糖抗病毒及抗肿瘤作用的研究姓名：于红申请学位级别：博士专业：海洋生物学指导教师：张学成2003.6.1钝顶螺旋藻多糖抗病毒及抗肿瘸作用的研究钝顶螺旋藻多糖抗病毒及抗肿瘤作用的研究摘要本文报道了钝顶螺旋藻多糖(PSP)抗病毒作用的研究以及抗肿瘤作用的研究。以改良的三氯乙酸法进行提取，所得产品多糖质量含量达92％以上，优于传统的Sevag法。抗病毒作用的研究选用单纯疱疹病毒l型(HSV一1)标准株(SM44)，体外实验在Vero细胞中进行，在证实PSP抗HSV一1活性优于目前临床治疗该病毒感染的首选药物阿昔洛韦的基础上，进一步探讨了PSP

2、抗HSV一1作用的机制。以不同剂量的PSP作用于病毒复制周期的各个阶段，以病毒半数感染量(TCID50)，细胞病变(CPE)，蚀斑形成单位(PFU)，MTT法及核酸分子杂交作为评价指标，结果表明，PSP抗HSV—l作用的机制与阻滞病毒向细胞吸附，抑制感染细胞病毒的复制和抑制HSV一1糖蛋白gG基因的转录有关。体内实验以PSP治疗小鼠HSV-1感染，结果PSP治疗组小鼠的存活率明显高于对照组。同时进行了PSP抗肿瘤作用的研究，体外实验以MTT法铡定PSP对肿瘤细胞增殖的抑制作用，光镜观察及流式细胞术检测PSP诱导的HeLa细胞凋亡，首次发现PSP可明显抑制HeLa细胞的增

3、殖，使HeLa细胞发生GI期阻滞并诱导HeLa细胞凋亡：PSP不仅可抑制HepG-2细胞的增殖，而且可抑制HepG一2细胞中IGF-2mRNA的表达；PSP对体外培养的胃肠道癌细胞亦有明显的抑制作用。体内实验观察PSP对小鼠S-180肉瘤的抑制作用，PSP在50～200mg／kg的剂量范围对小鼠S-180肉瘤，均有～定的抑制作用。本研究还采用真核基因表达技术，构建了HSV一1绿色荧光蛋白报告基因表达体系，结果不仅提示PSP抗HSV-1的机制可能与抑制HSV～1启动子ICP6活性有关，同时将为抗病毒药物的筛选提供一种简便、直观、快速、敏感的方法。关键词：钝顶螺旋藻多糖；提

4、取：抗病毒作用；抗肿瘤作用；绿色荧光蛋白钝顶蝶旋藻多糖抗嫡毒及抗肿痛作用的研究InvestigationontheantiviralandanticanceractivitiesofpolysaccharidesfromSpirulinaplatensisAbstractInthispaper,theantiviralandanticanceractivitiesofpolysaccharidesfrom印irulinaplatensis(PSP)werereported．AmodifiedTCA(trichloroaceticacid)methodforextract

5、ionofPSPwasconductedinourexperiment，andthepurityofthepolysaccharidesreachestO92％．Thismethodismoreconvenient．rapidandeconomicalthanthetraditionalSevagmethod．AstandardstrainofherpessimplexvirustypeI(HSV-1，SM44strain)wasusedtoinvestigatetheantiviralactivitiesofPSPinvitroandinvivo．Invitroexp

6、erimentswerecardedoutinVerocells，firstlytheactivityofPSPagainstHSV-1wasprovedtObebetterthanacidovir,whichiSthemostwidelyusedantiviralagentinclinic．Thenvariousconcen仕ationsofPSP，wereappliedtodifferentstepsofHSV一1replicationcycle．virusinfectivity(TCID50)，cytopathiceffect(CPE)，plaqueforming

7、unit(PFU)，methylthiazolyltetrazolium(M1。r)methodandinsituhybridizationwereusedforestimatingtheinfluenceofthepolysaccharidesonthevirus．neinvitroresultsindicatethatsomeofthemechanismsofPSPagainstHSV一1maybeexplainedbytheinhibitoryeffectsonvirusadsorption,virusreplicationandH