NFκBp65和ICAM1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义

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1、NF-κBp65和ICAM-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义作者：李成，漆明，张敬，马爱玲【摘要】目的研究体内核转录因子NF-κBp65和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学染色法检测30例口腔鳞状细胞癌组织和10例正常成年人口腔黏膜组织的NF-κBp65蛋白及ICAM-1的表达水平。结果(1)口腔鳞状细胞癌组织中NF-κBp65蛋白和ICAM-1表达水平均较正常口腔黏膜组织增强(P＜0.001)；(2)NF-κBp65蛋白表达和ICAM-1表达呈正相关(r=0.864，P=0.000)。结论NF-κBp

2、65的激活导致口腔鳞状细胞癌患者体内ICAM-1表达增强，促进了机体自身细胞免疫抗肿瘤的作用，可能成为口腔鳞状细胞癌治疗的一个新靶点。【关键词】口腔鳞状细胞癌；NF-κBp65蛋白；ICAM-1；免疫组织化学NF-κB(nuclearfactor-κB，NF-kappaB)是近年来发现的调节细胞基因转录的关键因子，参与多种相关基因转录调控，控制着细胞因子、黏附分子及生长因子等基因的表达，在肿瘤的发展过程中发挥着重要作用［1-2］。而细胞间黏附分子-1(intercellularadhesion8molecules-1，ICAM-1)参与介导细胞间的黏附、识别，

3、对肿瘤的转化起着重要作用［3］。本研究通过测定分析口腔鳞状细胞癌组织和正常口腔黏膜组织中NF-κBp65和ICAM-1的表达，探讨其在口腔鳞状细胞癌组织中的作用及临床意义。1材料和方法1.1材料来源收集宁夏医科大学附属医院病理科2006年11月—2008年1月30例口腔鳞状细胞癌的组织标本存档蜡块，其中男22例，女8例，年龄30～72岁，平均62.5岁。患者术前均未接受非甾体类消炎药治疗及放、化疗。10例正常口腔黏膜组织标本取自宁夏医科大学附属医院口腔科门诊自愿捐献口腔黏膜的健康志愿者，其中男4例，女6例，年龄21～52岁，平均30.5岁。1.2主要试剂和仪器

4、1.2.1主要试剂浓缩型鼠抗人NF-κBp65单克隆抗体；浓缩型鼠抗人ICAM-1单克隆抗体；PV9000免疫组化试剂盒；DAB显色试盒及多聚赖氨酸；阳性对照片。以上试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。81.3实验方法1.3.1常规HE染色实验标本经常规石蜡包埋、切片、HE染色。1.3.2免疫组织化学染色Pv-9000法检测NF-κBp65和ICAM-1抗原，具体步骤按试剂盒操作如下：①组织切片5μm，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；②NF-κB、ICAM-1采用微波抗原修复(3档，10min)，PBS洗3min×3次；③3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑制内

5、源性过氧化物酶活性，PBS洗3min×3次；④一抗(NF-κB，1∶200；ICAM-1，1∶200)37℃孵育2h，PBS洗3min×3次；⑤滴加试剂1，37℃孵育20min，PBS冲洗，3min×3次；⑥滴加试剂2，37℃孵育30min，PBS冲洗，3min×3次；⑦DAB显色液显色5min，自来水冲洗终止反应；⑧苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗为阴性对照，以试剂盒中已知阳性切片作为阳性对照。1.4免疫组织化学结果判断NF-κBp65位于胞浆和(或)胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应，高倍镜下(×400)每张片随机选5个视野，计数200个细胞/视野

6、。染色强度与背景无明显差别为-，阳性细胞数＜30%为+，30%～为++，≥60%为+++；ICAM-1以胞膜和胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，染色以阳性细胞数＜5%为-，阳性细胞数5%～为+，30%～为++，≥850%为+++。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。1.5统计学方法采用SPSS12.0统计软件，观察值是一端无确切数值的等级资料采用轶和检验，等级相关用Kendall'staub等级相关分析。显著性差异水平为α=0.01。2结果2.1NF-κBp65和ICAM-1的表达(表1)30例口腔鳞状细胞癌组织中NF-κBp65均呈阳性表达，其中4例

7、+，15例++，11例+++(图1，见封3)；10例正常口腔黏膜组织2例-，8例+(图2，见封3)。口腔鳞状细胞癌与正常对照组NF-κBp65阳性表达差异有统计学意义(P＜0.01)。ICAM-1蛋白在30例口腔鳞状细胞癌组织中3例-，7例+，10例++，10例+++(图3，见封3)；10例正常组织均无表达(图4，见封3)。口腔鳞状细胞癌与正常对照组ICAM-1阳性表达差异有统计学意义(P＜0.01)。表1NF-κBp65和ICAM-1在口腔鳞癌与正常口腔黏膜表达的比较口腔鳞状细胞癌中NF-κBp65蛋白表达与ICAM-1表达呈正相关，r=0.864，P＜0.

8、01(表2)。表230例口腔鳞状细胞癌