脂多糖对脊髓前角运动神经元的损伤作用

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1、细胞生物学杂志C细胞生物学杂志hineseJournalofCellBiology2008,30:114-120http://www.cjcb.org脂多糖对脊髓前角运动神经元的损伤作用细胞生物学杂志李彬l董惠1，2李哲l卡晖1，2刘晓云1，2孙萌萌l李春岩1，2*c河北医科大学第二医院神经内科，石家庄050000;2河北省心脑血管病研究所，石家庄050000)摘要研究脂多糖(LPS)诱导的炎症反应对运动神经元的损伤作用及其机制。采用SD乳鼠脊髓器官型培养，分为单纯培养液组和不同浓度LPS组，应用免疫组化、酶活性测定、电镜等技术衡量神经元损伤程度

2、。对LPS组分别给予细胞内钙离子婪合齐IJBAPTA-AM和NADPH氧化酶抑制剂apocynin，观察运动神经元数量和形态变化。结果显示LPS可以引起剂量和时间依赖性的运动神经元数量减少和培养液中乳酸脱氢酶含量增高，运动神经细胞生物学杂志元超微结构改变明显，中间神经元损细胞生物学杂志伤相对较轻。运动神经元缺乏钙网膜蛋白表达，而BAPTA-AM减轻运动神经元损伤，提示钙离子缓冲能力较低是其较易受损的原因之一。LPS可以引起NADPH氧化酶活性增高，而apocynin对LPS引起的运动神经元丢失有保护作用，说明NADPH氧化酶在炎症介导的运动神经元

3、损伤中发挥着关键作用。细胞生物学杂志细胞生物学杂志关键i司肌萎缩侧索硬化;器官型培养;脂多糖;运动神经元;NADPH氧化酶肌萎缩侧索硬化(amyotrophiclateralsclerosis,(Gibco),LPS(Sigma),BAPTA-AM(Alexis),apocyninALS)是以选择性运动神经元受损为特点的慢性进行(Merck)，小鼠抗非磷酸化神经丝单克隆抗体SMI-32性变性疾病，目前病因及发病机制尚不十分清楚。(SternbergerMonoclonals)，山羊抗钙(视)网膜蛋白越来越多的证据显示，运动神经元的选择性丢失并非(

4、calretinin)多克隆抗体、兔抗p47phox多克隆抗体和细胞自主性的[1-3]。在ALS患者和人类突变SODl转小鼠抗β肌动蛋白多克隆抗体(SantaCruz)，生物素细胞生物学杂志基因鼠脊髓组织中，存在大细胞生物学杂志量激活的小胶质细胞、化马抗小鼠IgG、兔抗山羊IgG和SABC试剂反应性星型胶质细胞、炎性细胞因子以及趋化因子(Vector),DAB显色试剂盒(北京中山化学试剂公司)，细胞生物学杂志等[叫，井且ICAM-l表达增多和小胶质细胞激活等出LDH测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，BCA蛋现在大量运动神经元丢失之前[5]。对

5、ALS细胞生物学杂志患者血白定量试剂盒(Novagen)。细胞生物学杂志清、皮肤及肌肉的分析结果显示机体存在广泛的炎1.2脊髓器官型培养症反应[8-12]。在SODIG37R转基因小鼠中，给予脂多糖参照、Rothstein等[14]及本室建立的方法[15]，将7日(lipopolysaccharide,LPS)腹腔注射，激活天然免疫系龄SD乳鼠在无菌条件下断头取出脊髓，解音。显微镜统，可加速疾病的进展[1匀。这些均提示炎症反应可下迅速分离神经根，用活组织切片机(MickleLabora•能参与了运动神经元损伤但其确切作用及具体机制ωηEngine

6、ering，Gomshall,Surrey,UK)将腰段脊髓切还不明确。成350μm厚的薄片，将脊髓薄片转移到Gey's平衡LPS是革兰氏阴性杆菌细胞壁的主要成分，通过盐液(含葡萄糖6.4mg/ml)中分离成单片，6孔培养板Toll样受体4，激活机体的天然防御系统，引起炎症反内每孔加入1ml培养液(50%MEM含25mmol/L细胞生物学杂志应。本研究应用LPS利用器官型脊髓薄片培养技HEPES，25%热灭活马血清，25%Hanks'平衡盐液术建立了炎症介导的运动神经元损伤的体外模型，并含25.6细胞生物学杂志g/L葡萄糖、2mmol/L谷氨酷肢

7、)，并放置以此为基础，探讨运动神经元的损伤机制，为开发新Millicell-CMinsert，用吸管将脊髓片移至insert上，每的治疗策略提供理论依据。孔5片，移去insert膜表面多余的液体，放入CO2培细胞生物学杂志细胞生物学杂志1材料与方法收稿日期:2007-09-24接受日期:2007-11-12国家自然科学基金资助项目(No.30670732)1.1材料*通讯作者。TeVFax:0311-87064024,E-mail:hblicy5@yahoo.com马血清、Hanks'平衡盐液、最小基础培养基cn与世界接轨，用宝尔超纯水系统Tel

8、:021-31263268www.baolor.com细胞生物学杂志细胞生物学杂志李彬去号，脂多糖对脊细胞生物学杂志髓前角运动神经元的损