天祝白牦牛、岷县黑裘皮羊成纤维细胞库的构建

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2、本论文选取了天祝白牦牛．岷县黑裘皮羊这两种国家级畜禽遗传资源保护品种作为研究对象，采用胰蛋白酶热消化法，分别构建这两种动物的多种组织的成纤维细胞库，并对其生长曲线、倍增时问．染色休核型．同工酶，微生物污染以及转化表达外源基因等特性进行研究。旨在成功地建立其成纤维细胞库，从细胞水平上对优良地方保护品种的遗传资源进行有效保存和利用，并为其它动物遗传资源保存提供可行的方法借鍪，同时所建的细胞库还可为胚胎干细胞研究．转基因工程．克隆等细胞分子生物学研究提供宝贵材料．天祝白牦牛保存样本28个。冻存细胞472支；岷县黑裘皮羊保存样本23个。碾存细胞290支，试

3、验结果如下：．1，培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞，绝大部分呈梭形或不规则三角形，细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势，细胞增殖快，生长旺盛．2，绘制的细胞生长曲线显示，复苏细胞生长状况很好，生长曲线均呈。s”型，细胞每代生长均经历了潜伏期．据敷生长期和停滞期，符合体外细胞生长搜律．3，复苏后细胞活率均保持在90％以上，传代后生长状况与冻存前基本一致，细胞形态和生长速度没有明显变化．冻存细胞生物学特征稳定．4、微生物污染检测呈阴性，表明细胞未受到细茵．真菌，病毒及支原体污染．5、核型分析：天祝白牦牛体外培养的成纤维细胞正常染色体数为2nffi

4、60，包括29对常染色体和l对性染色体，常染色体29对为端着丝点染色体，性染色体X和T染色体为近中着丝粒染色体，计数50个细胞染色体数目时，并对2n=60的进行统计，为74Y,，染色体中二倍体占主体；岷县黑裘皮羊体外培养的成纤维细胞正常染色体数为2nffi54，包括26对常染色体和l对性染色体．常染色体有3时为中着丝点染色体，23对为端着丝点染色体，进行统计50个细胞染色体t2n=54占84X，表瞬所建细胞痒的细胞稳定的二倍体细胞占主体，遗传性基本稳定．6，乳酸脱氢酶(LDH)同工酶是遗传成因性的同工酶，天祝白牦牛各种细胞的乳酸脱氢酶同工酶都显现五

5、条区带，从“阳极”到。阴极”分别为LDHl，LDH2，LDtl，LDH．LDH；，岷县黑裘皮羊艰中细胞都显现三务区带，从。阳极”到。阴极”分别为LDH，，LDH：，LDH，，通过LDH同工酶的区带分布和相对百分含量的比较表明不同品种的LDH同工酶含量不同，说明LDH同工酶具有明显的品种特异性；各品种细胞LDH同工酶酶谱表明，细胞遗传性能稳定，7．红色荧光质粒在戍纤维细胞中的转化表达，试验表明成纤维细胞未发生与其它物种细胞的交叉污染和恶性转化，并能有效地转化表达外源基因，转染率可以作为衡量细胞活力的指标．同时转染成功的细胞也可以为结构基因纽研究，后基

6、因组研究、转基因研究提供大量的供体细胞．关键词：天祝白牦牛，岷县黑裘皮革，成纤维细胞，细胞生物学特性．核型分析．同工酶，质粒转染EstablishmentofFibroblastCellBankforTianzhuwhiteyakandMinxianblackfursheepAbstractTianzhuwhireyakandMinxianblackfursheepwereselected∞theobjectsofthestudy，∞theyaretheexcellentvarietiesfromGansuprovince．Usingtrypsin

7、heatdigestion，fibrobla,qscellbankfromthetwoanimals’tissuesweresuccessfullyconstructed．Theirgrowthdynamic，populationdoublingtime，karyotypeanalysis，isozymepattern，microorganismcontamination，transformation，expressionofforeigngenesandothercharacteristicswerestudied．nestudyaimedIos

8、uccessfullyestablishflbroblastsbanksforthepreservationandeffe