Bcl2、Bax和Caspase3在酒精性肝病大鼠肝组织中的表达和五田保肝液的干预作用

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1、Bcl-2、Bax和Caspase-3在酒精性肝病大鼠肝组织中的表达和五田保肝液的干预作用作者：毕业东，苏金玲，安先凤，宋星星，范英昌【摘要】目的研究Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA在酒精性肝病大鼠肝组织中的表达变化及五田保肝液对其表达的干预作用。方法选用健康清洁级雄性Wistar大鼠64只，随机分为对照组10只;模型组、中药治疗组、阳性对照组各18只。采用62度白酒(10ml·kg-1·d-1)、玉米油(2ml·kg-1·d-1)、吡唑(25mg·kg-1·d-1)混合物灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型。12周末处死大鼠，取肝组织采用荧光实时定量RT-PCR法检测Bcl

2、-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达。结果模型组Bcl-2基因表达较之对照组和中药治疗组显著性降低(P<0.01)，与阳性对照组差异不明显(P>0.05);模型组Bax、Caspase-3基因表达较之其它各组均明显升高(P<0.01);中药治疗组、阳性对照组Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);中药治疗组和阳性对照组Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达差异亦不具有显著性(P>0.05)。结论大量饮酒可通过下调Bcl-2基因的表达，上调Bax、Caspase-3基因的表达促进肝细胞的凋亡，导

3、致肝损伤。而五田保肝液可通过调节Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达，抑制肝细胞的凋亡，起到保肝护肝作用。【关键词】五田保肝液;Bcl-2;Bax;Caspase-3;酒精性肝病;大鼠10　酒精性肝病(AlcoholicLiverDisease，ALD)的发生与多种因素关系密切。其中，长期大量饮酒通过各种机制诱导的肝细胞凋亡是ALD发生发展的重要原因。在长期的临床实践中证明五田保肝液(专利号：ZL021581703)对ALD有预防和治疗作用，但是其具体发挥作用的靶点和机制不清。本文拟探讨五田保肝液是否对酒精性肝病大鼠肝细胞的凋亡具有干预作用。　　1材料与仪器　　1.1动

4、物清洁级健康Wistar大鼠64只，雄性，6周龄，体质量(200±20)g，由中国医学科学院实验动物所提供。　　1.2材料和仪器　　实验用酒为62度牛栏山二锅头，由北京顺鑫农业股份有限公司生产。五田保肝液由深圳市三九现代中药有限公司提供;阳性对照药物易善复(多烯磷脂酰胆碱胶囊)生产单位为赛诺菲安万特(北京)制药有限公司，批号/BN：D8099，规格228mg。RNA提取试剂盒RNA-SolvReagent购自Omega公司;SYBRPrimeScriptTMRT-PCRKit试剂盒购自TaKaRa公司。ABI7300荧光定量PCR仪购自美国ABI公司，2700型PCRSystem扩增仪

5、为AppliedBiosystems公司产品。10　　2方法　　2.1实验分组和动物模型制备适应性喂养1周后，64只大鼠随机分为4组：对照组10只，模型组、中药治疗组、阳性对照组各18只。　　造模方法[1]：模型组、中药治疗组和阳性对照组大鼠均以62度牛栏山二锅头酒(10ml·kg-1·d-1)、玉米油(2ml·kg-1·d-1)、吡唑(25mg·kg-1·d-1)混合物灌胃,2次/d,早晚各1次。中药治疗组、阳性对照组、模型组大鼠于两次灌胃之间分别给予相当于成人等剂量的五田保肝液(1020mg·kg-1·d-1)、易善复(123.12mg·kg-1·d-1)和相应剂量的生理盐水灌胃，

6、对照组则每日3次以生理盐水灌胃。各组大鼠实验期间均予全价营养颗粒饲料喂养，自由进食饮水。造模时间为12周。　　2.2荧光实时定量RT-PCR检测凋亡相关的基因表达　　2.2.1引物的设计及合成Bcl-2引物序列：forward：5′-TGAACCGGCATCTGCACAC-3′;revese：5′-CGTCTTCAGAGACAGCCAGGAG-3′;Bax引物序列：forward：5′-CGGCGAATTGGAGATGAACTG-3′;revese：5′10-AGCAAAGTAGAAGAGGGCAACC-3′;Caspase-3引物序列：forward：5′-CAGACAGTGGAAC

7、TGACGAT-3′;revese：5′-TTTCAGCATGGCGCAAAGTG-3′。由上海生工生物工程技术服务有限公司使用美国PE公司391型DNA自动合成仪合成引物。　　2.2.2标本的留取和处理造模12周末颈椎脱臼处死大鼠，大鼠处死前12h禁食水。处死大鼠后迅速剖腹取出肝脏，冰生理盐水冲洗，取肝右叶部分组织置于冻存管后迅速投入液氮中冷冻保存，以备检测分子生物学指标。所有手术器械均经DEPC水浸泡和高压灭菌消毒处理。　　2.2.3总RN