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《黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究【摘要】：目的探讨中药黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病的作用机制。方法采用体外细胞培养技术,选用人角质形成细胞株colo-16,观察黄连、土大黄、苍术单方及复方中药提取液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激前后人角质形成细胞增殖的影响。结果黄连、土大黄、苍术单方及复方中药提取液在TNF-α刺激前后均表现出显著的抑制人角质形成细胞增殖的作用,与对照组甲氨喋呤和环孢素A相比较,差异有显著性意义(P<0.01)。结论中药复方通过抑制人角质形成细胞的异常增殖对银屑病有治疗作用。【关键词】黄连 土大黄 苍术 角质形成细胞 银屑病
2、 细胞培养 Abstract：ObjectiveTostudythemechanismoftheextractofthreekindsofChineseherbsintreatingpsoriasis.MethodsThreekindsofChineseherbs(coptisroot,patiencedockrootandatratylodesrhizome)wereextracted.Withthecultureofhumantransformedkeratinocytecelllinecolo-16cellsasamodel,thesingleandcom
3、poundeffectsonthegrowthofKCwerestudiedbeforeandafterstimulatedbyTNF-α.ResultsThesingleandcompoundextractofthreeChineseherbscould7restraintheproliferationofKCbeforeandafterstimulatedbyTNF-α.TheeffectwasmoreremarkablethanthecomparedmethotrexateandcyclosporinA(P<0.01).ConclusionsTheth
4、reekindsofChineseherbscantreatpsoriasisbyrestrainingtheproliferationofKC. Keywords：coptisroot；patiencedockroot；atratylodesrhizome；keratinocytecell；psoriasis；cellculture 在银屑病表皮中多种细胞因子呈现高表达,能够刺激角质形成细胞(KC)发生银屑病样改变,其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在银屑病的发病过程中起着重要的作用。本研究选用黄连、土大黄和苍术3味中药制成单味及复方中药提取液,采用体外细胞培
5、养技术,观察单味及复方中药提取液对TNF-α刺激前后KC增殖的影响,探讨中药抗银屑病的作用机制。 1实验材料 1.1细胞株 人表皮鳞癌细胞株colo-16,购自北京师范大学。7 1.2主要试剂 重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α),购自PROMEGA公司,批号121CY25G153。四氮唑蓝(MTT),美国Sigma公司生产。 1.3药物 甲氨喋呤(MTX),上海华联制药有限公司生产,批号020805；氢化可的松琥珀酸钠,天津市生物化学制药厂生产,批号20020305；环孢素A标准品(98.8%),购自中国药品生物制品检定所,批号0495-20020
6、2；中药饮片,经鉴定为《中华人民共和国药典》规定品种。 2实验方法 2.1中药提取液的制备 将药物粉碎,过20目筛,称取药物粉末30g,加蒸馏水浸泡2h,超声提取30min,药液高速离心10min,取上清液,蒸发浓缩为100%液,加2倍体积95%乙醇,充分混匀,放置48h,过滤,于90℃水浴回流乙醇,得到100%的提取液,调pH值为8.0,抽滤去除沉淀,装入安瓿,密封后高温高压灭菌(10mL/瓶)。7 2.2中药提取液对肿瘤坏死因子-α刺激前角质形成细胞增殖的影响 培养的colo-16细胞生长接近单层时,消化后计数,以每孔100μL(5×103个)接种于9
7、6孔板,于37℃、5%CO2培养箱培养。接种24h后,显微镜下观察细胞已贴壁生长良好,达40%～50%融合,吸出各孔上清及未贴壁细胞。空白组标本数为7,其余各组标本数均为8,空白组仅加入DMEM培养液,氢化可的松组加药剂量为5mg/L,环孢素A组加药剂量为5mg/L,甲氨喋呤组加药剂量为5mg/L,中药大剂量组加药剂量为50g/L,其中黄连组、土大黄组、苍术组是单味中药提取液,黄连＋土大黄组由黄连和土大黄提取液以2∶1的比例配制,黄连＋苍术组由黄连和苍术提取液以2∶1的比例配制,黄连＋土大黄＋苍术组由黄连、土大黄、苍术提取液以2∶1∶1的比例配制,中药中剂量组和小
8、剂量组加药
