资源描述：
《黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究论文.freelechanismoftheextractofthreekindsofChineseherbsintreatingpsoriasis.MethodsThreekindsofChineseherbs(coptisroot,patiencedockrootandatratylodesrhizome)antransformedkeratinocytecelllinecolo-16cellsasamodel,thesingleandpoundeffectsonthegrou
2、latedbyTNF-α.ResultsThesingleandpoundextractofthreeChineseherbscouldrestraintheproliferationofKCbeforeandafterstimulatedbyTNF-α.TheeffectoreremarkablethantheparedmethotrexateandcyclosporinA(P0.01).ConclusionsThethreekindsofChineseherbscantreatpsoriasisbyrestrain
3、ingtheproliferationofKC.Keye；keratinocytecell；psoriasis；cellculture在银屑病表皮中多种细胞因子呈现高表达,能够刺激角质形成细胞(KC)发生银屑病样改变,其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在银屑病的发病过程中起着重要的作用。本研究选用黄连、土大黄和苍术3味中药制成单味及复方中药提取液,采用体外细胞培养技术,观察单味及复方中药提取液对TNF-α刺激前后KC增殖的影响,探讨中药抗银屑病的作用机制。1实验材料1.1细胞株人表皮鳞癌细胞株colo-16,购自北京师
4、范大学。1.2主要试剂重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α),.freela公司生产。1.3药物甲氨喋呤(MTX),上海华联制药有限公司生产,批号020805；氢化可的松琥珀酸钠,天津市生物化学制药厂生产,批号20020305；环孢素A标准品(98.8%),购自中国药品生物制品检定所,批号0495-200202；中药饮片,经鉴定为《中华人民共和国药典》规定品种。2实验方法2.1中药提取液的制备将药物粉碎,过20目筛,称取药物粉末30g,加蒸馏水浸泡2h,超声提取30min,药液高速离心10min,取上清液,蒸发浓缩为
5、100%液,加2倍体积95%乙醇,充分混匀,放置48h,过滤,于90℃水浴回流乙醇,得到100%的提取液,调pH值为8.0,抽滤去除沉淀,装入安瓿,密封后高温高压灭菌(10mL/瓶)。2.2中药提取液对肿瘤坏死因子-α刺激前角质形成细胞增殖的影响培养的colo-16细胞生长接近单层时,消化后计数,以每孔100μL(5×103个)接种于96孔板,于37℃、5%CO2培养箱培养。接种24h后,显微镜下观察细胞已贴壁生长良好,达40%～50%融合,吸出各孔上清及未贴壁细胞。空白组标本数为7,其余各组标本数均为8,空白组仅加入
6、DMEM培养液,氢化可的松组加药剂量为5mg/L,环孢素A组加药剂量为5mg/L,甲氨喋呤组加药剂量为5mg/L,中药大剂量组加药剂量为50g/L,其中黄连组、土大黄组、苍术组是单味中药提取液,黄连＋土大黄组由黄连和土大黄提取液以2∶1的比例配制,黄连＋苍术组由黄连和苍术提取液以2∶1的比例配制,黄连＋土大黄＋苍术组由黄连、土大黄、苍术提取液以2∶1∶1的比例配制,中药中剂量组和小剂量组加药剂量分别为10、1g/L,提取液的配制同中药大剂量组。加药后继续培养48h,每日在倒置显微镜下观察细胞生长情况。2.3中药提取液对
7、肿瘤坏死因子-α刺激后角质形成细胞增殖的影响给药方法同上,TNF-α组浓度为100U/mL,其余各组在加入药物的同时加入浓度为100U/mL的TNF-α,继续培养48h,每日在倒置显微镜下观察细胞生长情况。2.4细胞存活率的测定采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)1,实验重复2次。细胞存活率＝药物处理孔OD值/培养液空白对照组OD值×100%。2.5统计学方法实验结果采用Excel软件处理,组间比较应用t检验。3结果(见表1)表1中药提取液对TNF-α刺激前后KC增殖的影响(略)注：与空白组比较,*P0.05,**P0
8、.01；与环孢素A组比较,△P0.05,△△P0.01；与甲氨喋呤组比较,▲P0.05,▲▲P0.014讨论银屑病是一种炎症增生性皮肤病,而KC是本病临床及病理表现最集中的细胞。银屑病的主要病理表现即为KC的异常增殖、分化不全,及局部炎细胞浸润等炎症表现。本实验选用的细胞为人表皮鳞癌细胞株colo-16,是来源于KC的肿瘤细胞,本
