柴胡皂苷的SCCO2＋乙醇水溶液萃取工艺研究

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1、柴胡皂苷的SC-CO2＋乙醇-水溶液萃取工艺研究作者：侯彩霞，李淑芬，樊丽华，吴尚卓【摘要】　　目的研究萃取柴胡皂苷a（SSa）的同时，萃取柴胡皂苷d(SSd)的工艺。方法以乙醇-水为共溶剂，利用SC-CO2萃取柴胡皂苷，利用高效液相色谱分析浸膏中皂苷的含量。结果该方法在萃取SSa的同时萃取出SSd，从而有效避免了SSd的热解。结论以乙醇-水溶液做共溶剂，利用超CO2（SC-CO2）萃取SSa和SSd的优化工艺条件为乙醇浓度为95%、用量为12ml/g萃余物，萃取温度为60℃，萃取压力为30MPa。萃取所得浸膏收率和浸膏中SS

2、a的含量分别是水提醇沉法提取所得浸膏收率和浸膏中SSa含量的6倍和2倍。【关键词】柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；乙醇-水溶液　　柴胡是我国的传统中药和常用中药，具有疏散退热、疏肝解郁、升阳举气之功效，用于治疗寒热往来、胸满胁痛、口苦耳聋、头痛目眩等。柴胡皂苷(saikosaponins，SS)是柴胡的主要活性成分之一，具有解热、镇痛、镇静、消炎、抗病毒、免疫调节、保肝、护肾、促皮质酮激素等药理作用［1～4］。根据其化学结构不同柴胡皂苷可分为柴胡皂苷a、b、c和d等，一般认为柴胡皂苷a（SSa）和d(SSd)为其有效的活性成分，其中以

3、SSd的药理活性最强［5，6］10。柴胡皂苷传统的提取方法多采用水煎煮法或水提醇沉法，提取过程中柴胡皂苷a和d受热容易导致水解变性［7，8］。近年来，超临界CO2萃取技术作为一种新兴的萃取技术具有选择性好、萃取效率高、萃取温度接近室温等优点，特别适合对热不稳定的中药成分的提取。共溶剂（co-sovlent，又称夹带剂或改性剂）的加入极大地拓宽了SC-CO2萃取的应用范围，使得SC-CO2不仅用于挥发油等脂溶性成分的萃取，还用于皂苷类、醌类等极性成分的萃取［9，10］。已有的实验研究结果表明，利用乙醇-水溶液作共溶剂，可以在萃取

4、皂苷a的同时萃取柴胡皂苷d［11］，但没有对萃取物中皂苷a、c和d的含量进行定量的测定。本文旨在以SSa和SSd为指标，以乙醇-水作共溶剂研究利用SC-CO2萃取柴胡皂苷，并将SC-CO2＋乙醇-水萃取工艺与传统的水提醇沉工艺进行比较。　　1器材　　1.1材料与试剂实验用原料为SC-CO2萃取柴胡挥发油的萃余物，简称萃余物。SSa和SSd标准品购自中国药品生物制品检定所，SSa标准品批号110777-200405，SSd标准品批号110778-200404。CO2纯度为99.9％，购自天津安兴气体有限公司。乙醇（分析纯）、甲醇

5、（色谱纯）购自天津大学科威公司。　　　1.2仪器实验用超临界萃取设备为Spe-ed10SFE型超临界萃取仪，购自美国Appliedseparations公司（Allenton，PA，USA）。实验设备如图1所示，主要包括升压系统、冷却系统、萃取系统和接收系统，设备详细的操作过程见文献［12］。　　2方法　　　实验前首先向萃取柱装入5g萃余物。CO2经冷却槽冷却后经高压泵加压至所需压力，进入萃取柱，与预先装填好的萃余物混合。当萃取柱温度和压力升至设定的萃取温度和压力后打开出口阀，然后打开共溶剂泵将储罐的共溶剂加入萃取柱。溶解了柴

6、胡皂苷提取物的共溶剂与SC-CO2混合物经过加压阀和微调阀进入接收瓶，CO2气体经湿式流量计计量后放空。萃取液旋转蒸发至近干，真空干燥箱干燥后称量浸膏量，计算浸膏萃取率，并利用高效液相色谱法分析浸膏中SSa和SSd的含量。其中浸膏萃取率（％）和浸膏中SSa和SSd的含量的计算公式为：　　浸膏萃取率（％）＝萃取所得浸膏质量（g）/萃取用萃余物质量（g）×100%①　　SSa/SSd含量（mg/g浸膏）＝浸膏中SSa/SSd的量（mg）/浸膏的质量（g）②10　　2.1水提醇沉法称取萃余物30g，加入8倍量的蒸馏水，煎煮3h，煎煮

7、过程中补充4倍量蒸馏水，过滤，合并滤液，旋转蒸发浓缩至约1g/ml。将浓缩液均分4份，加入18倍原料量95%的乙醇，静置过夜后过滤，滤液在水浴温度50℃下旋转蒸发至近干，真空干燥后称量浸膏量，计算浸膏萃取率，并利用高效液相色谱法分析浸膏中SSa和SSd的含量。　　2.2浸膏中SSa和SSd含量的测定利用高效液相色谱（HPLC）测定浸膏中SSa和SSd的含量。进行HPLC分析前首先利用大孔树脂对提取所得浸膏进行预处理：取提取所得浸膏约0.1g，加2%氢氧化钠溶液20ml，超声加速溶解，分次加于AB-8大孔吸附树脂柱(60～100

8、目，内径0.7cm，长5cm)上，用水约20ml洗脱至无色，水液弃去，再用无水乙醇20ml洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至近干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微滤头过滤，即可作为样品液使用。　　HPLC分析用色谱柱为TurnerC18(2