小鼠造血干细胞移植对损伤肾组织细胞增殖的影响

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1、青岛大学硕士学位论文小鼠造血干细胞移植对损伤肾组织细胞增殖的影响姓名：徐峰申请学位级别：硕士专业：病理生理学指导教师：徐珞20070602小鼠造血千细胞移植对损伤肾组织细胞增殖的影响中文摘要背景：传统的急性肾小管坏死修复理论认为，肾小管的重建依赖于坏死区周围存活的肾小管上皮细胞，这些细胞经过去分化、增殖和分化成熟等过程修复坏死的肾小管，重建其组织结构和功能。近年来随着对于细胞研究的深入，发现成体组织内存在着一些被称为成体干细胞的多能干细胞，这些干细胞具有多向分化的能力，甚至可以跨越谱系界限分化成其它组织细胞，在损伤修复中具有重要意义。骨髓中含有丰富的成

2、体干细胞，最近有数项研究认为骨髓来源的干细胞可以分化成肾小管上皮细胞，参与急性肾小管坏死的修复，但目前对这一结论尚有争议。目的：本研究拟通过建立缺血再灌注肾损伤动物模型，观察骨髓来源的干细胞能否分化成肾小管上皮细胞，深化对造血干细胞可塑性的认识，探讨造血干细胞在急性肾小管坏死修复中的作用，丰富急性肾小管坏死修复的理论。方法；绿色荧光蛋白标记的C57BL／6转基因小鼠提供造血干细胞，同种无荧光标记的C57BL／6小鼠分为四组：(1)正常对照组：观察正常小鼠血液学指标和肾组织结构；(2)缺血再灌注组：手术夹闭小鼠单侧肾蒂30rain再开放建立单侧肾脏缺血再

3、灌注损伤模型，建模后第3天、7天、14天、28天分别取肾脏标本，观察双侧肾脏病理变化：(3)造血干细胞移植组：骨髓造血干细胞移植，分别在移植后第56天、84天处死，观察造血干细胞在无损伤的小鼠肾脏中的分化；(4)造血干细胞移植+缺血再灌注组：造血干细胞移植后第56天建立单侧缺血再灌注损伤模型，对照观察供体造血干细胞在双侧肾脏的分化情况。造血干细胞移植受体小鼠的骨髓重建经血液常规检测确认。采用荧光组织化学、免疫组织化学等方法观察绿色荧光在造血干细胞移植小鼠肾脏的分布及数量。结果t单侧肾脏缺血再灌注可引起小鼠急性肾小管坏死改变，近端小管最易受累，表现为受累

4、的上皮细胞刷状缘脱落，细胞扁平，管腔扩张；部分细胞从基底膜脱离，可见裸露的基底膜：部分小管上皮细胞空泡变性及肿胀破裂，胞核消失；管腔内可见脱落的上皮细胞，数处管腔内充满细胞碎屑，可见斑片状的坏死区；间质水肿，散在炎性细胞浸润。肾脏缺血再灌注损伤时对侧肾脏损伤程度相对较轻，修复时间也相应缩短(14天)。肾脏组织学评分结果显示，缺血再灌注损伤手术侧病变重于对侧，修复时间较长。生化检验结果发现，单侧肾脏缺血再灌注组尿素氮、肌酐水平无显著改变(P>0．05)；小鼠肾小管的修复过程从第3天开始，28天可观察到肾小管修复基本完成，造血干细胞移植后肾小管坏死模型小鼠

5、表现出同样的演变过程。造血细胞移植后56天、84天的小鼠肾小管中有少量绿色荧光蛋白阳性细胞存在，激光共聚焦显微镜进一步证实这些细胞位于肾小管，并表达肾小管上皮细胞特异性功能蛋白Megalin，表明供体造血干细胞已分化成有功能的肾小管上皮细胞，提示，在无肾小管损伤的生理情况下，造血干细胞可以参与肾小管上皮细胞的更新。缺血再灌注模型中，手术侧肾组织中供体造血干细胞来源的肾小管上皮细胞数量明显多于对侧，提示造血干细胞定向分化的水平与肾小管损伤程度有关。结论：缺血再灌注损伤可诱导小鼠急性肾小管坏死；在生理情况下，造血干细胞可以分化成肾小管上皮细胞，参与肾小管上

6、皮的更新：急性肾小管坏死可以“动员”造血干细胞参与损伤修复过程，造血于细胞向肾小管上皮细胞定向分化的水平与肾小管损伤程度有关；急性肾小管坏死修复由肾脏原位细胞和骨髓造血干细胞共同完成。硕士研究生徐峰(病理生理学)指导教师徐珞教授关键词：造血干细胞；急性肾小管坏死；缺血再灌注：修复；绿色荧光蛋白；激光共聚焦显微镜Roleofhemoooieticbloodstemcell缸伍erecoveryofacutetubularnecrosis妯mi’ceBACKGROOND-AccordingtOtraditional岫oftherecoveryatter∞l

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