MMP7基因及蛋白表达在胃癌侵袭和转移中的作用

《MMP7基因及蛋白表达在胃癌侵袭和转移中的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国医科大学博士学位论文MMP-7基因及蛋白表达在胃癌侵袭和转移中的作用姓名：冯众一申请学位级别：博士专业：肿瘤学指导教师：徐惠绵2003.4.1MMP一7基因及蛋白表达在胃癌侵袭和转移中的作用中文摘要目的恶性肿瘤严重威胁人类的健康，肿瘤细胞向周围组织器官侵袭和转移是恶性肿瘤最重要的生物学特性，也是肿瘤病人死亡的主要原因。肿瘤侵袭转移一直是肿瘤学研究的热点和难点问题。肿瘤侵袭和转移是受多基因产物调节的多步骤、多阶段过程，包括粘附、降解、运动和血管形成等。其中蛋白水解酶对细胞外基质降解是导致肿瘤转移不可缺少的环节。因此，针对蛋白酶在肿瘤侵袭和转移中的作用受到国内外学者的普遍关注。MMP

2、一7(matrilysin)是基质溶解素的一种，基质金属蛋白酶家族中分子量最小的成员，不仅具有其它MMPs所具有的高度蛋白溶解能力及广泛的底物特异性，并在肿瘤血管形成中发挥重要作用。同时与其它基质金属蛋白酶不同的是MMP一7主要为上皮源性肿瘤细胞高表达，基质不表达。MMP一7这种上皮源性肿瘤细胞增高表达的相对特异性有助于研究其在肿瘤侵袭、转移中的作用，并可能成为判断肿瘤细胞恶性生物学行为的一个指标。目前关于MMPL7在胃癌发生发展中的作用的研究国外较多，国内很少。研究主要限于胃癌原发灶与浸澜深度、淋巴结转移及腹膜转移的关系。腹水MMP一7基因表达在腹膜转移中的直接作用的研究尚未见报道

3、。本实验通过检测胃癌组织及腹腔冲洗液MMP--7基因及蛋白表达，研究其与胃癌浸润深度、淋巴结转移的关系及在腹膜转移中的作用，为临床应用蛋白酶抑制剂防治淋巴结及腹膜转移提供理论依据和治疗靶点。方法腹水或腹腔冲洗液标本收集：术中开腹后即刻于Douglas腔或右肝下置入一根16号导尿管，注入无菌生理盐水100毫升，轻轻搅动后抽出60毫升。若有自然腹水则直接抽取。取腹水时尽可能避免出血，防止腹水中混入血液成分。抽取的腹水或冲洗液分成两等分在低温离心机中2000转／分，离心15分钟。一部分上清液置于一70。C冰箱中冻存，沉渣涂片HE染色查瘤细胞；另一部分取沉渣立即加入1毫升阿肋l液进行总RNA

4、提取及反转录，将eDNA置-700C冰箱中冻存，以备PCR扩增。lit—PCR扩增：1)总RNA提取；2)逆转录合成MMP一7eDNA；3)PCR扩增MMP一7；4)PCR扩增产物的检测与半定量。其中Trizol一步法总RNA提取。PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳银染。自动图象分析系统分别对目的基因MMP一7及内对照GAPDH的扩增产物条带进行分析，通过MMP一7指数对MMP一7mRNA进行半定量。MMP一7指数=MMP一7值／GAPDH值，MMP-7指数与其mRNA含量呈正变关系。免疫组化染色：采用S—P法。微波修复处理。PBS代替一抗作空白对照，已知表达MMP一7乳腺癌切片作

5、阳性对照。用正常兔血清代替一抗作阴性对照，参照S—P试剂盒说明书进行免疫组化染色。统计学分析：最后应用x2检验对免疫组化结果及t检验对RT—PCR结果进行统计学分析。结果胃癌组织MMP一7基因及蛋白表达：MMP一7蛋白几乎均为胃癌细胞胞浆或胞膜表达，阳性率为,16．6％，基质不表达，偶有正常胃粘膜上皮细胞极弱表达。浸润深度透浆膜者MMP一7基因及蛋白表达显著高于未透浆膜者(P<0．05)；MMP一7基因表达与TNM分期无关；Ⅲ／Ⅳ期胃癌MMP一7蛋白表达显著高于I／Ⅱ期胃癌(p

6、5)；MMP一7基因及蛋白表达与胃癌淋巴结转移密切相关。淋巴结转移阳性者MMP一7基因及蛋白表达显著高于淋巴结转移阴性者(P<0．05)；淋巴结转移距离Ⅱ站及以上者显著高于Ⅱ站以下者(P<0．05)；淋巴结转移度>50％者显著高于淋巴结转移度<50％者(P<0．05)；MMP一7基因表达与淋巴结转移数目无关；淋巴结转移数目>5个者MMP-7蛋白表达显著高于<5个者(P<0．05)。·2·腹腔冲洗液MMP一7基因表达：腹水MMP一7基因表达与浸润深度及TNM分期无明显关系。但浸润深度透浆膜及Ⅲ／Ⅳ期胃癌病人腹水MMP一7基因表达仍高于未透浆膜及I／Ⅱ期者。腹水MMP一7基因表达与淋巴结

7、转移密切相关。淋巴结转移阳性者显著高于阴性者(P<0．01)；淋巴结转移数目>5个者显著高于<5个者(P<0．05)；淋巴结转移距离Ⅱ站及以上者显著高于Ⅱ站以下者(P<0．05)；淋巴结转移度>50％者显著高于<50％者(P