多重PCR检测耐万古霉素肠球菌的基因型研究

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1、多重PCR检测耐万古霉素肠球菌的基因型研究【摘要】目的：研究7株耐万古霉素肠球菌（VRE）耐药表型和基因型，指导临床合理使用抗生素。方法：采用琼脂筛选法筛选VRE，并分别用Etest、多重PCR和限制性长度多态性分析方法检测万古霉素耐药或中介肠球菌株的表型和基因型。结果：7株对万古霉素耐药或中介的肠球菌株，2株为vanA型，3株为vanC1型，1株为vanC2/3型，1株基因型未明，基因型和表型一致。结论：7株VRE中有2株vanA型，提示实验室准确检测VRE对临床上合理使用抗生素和预防VRE的流行是非常重要的。【关键词】万古霉素；耐药性

2、；肠球菌；表型；基因型〔Abstract〕ObjectiveVancomycinresistancephenotypesandgenotypeswerestudiedforknowthedistributionof7vancomycinresistantenterococci(VRE)inShenzhenSecondPeople'sHospitalandinstructrationalapplicationofantibioticsclinically.MethodsScreeningVREwithagarscreen,anddetect

3、ingthephenotypesandgenotypesofvancomycinresistantorintermediateenterococciwithEtestandmultiplexPCR-restrictionfragmentlengthpolymorphism.Results7strainswerevancomycin-resistantorintermediatetoenterococci,vanA7for2strainsweredetected,vanC1for3strainsweredetected,vanC2/3for

4、1strainwasdetected,1strainwasunknown.Theirphenotypesconfirmedtothegenotypes.Conclusion2strainsvanAhavefound.ItisimportantforclinicallaboratorytodetectVREwithrightmethodstoinstructrationalapplicationofantibioticsclinicallyandpreventVREprevalence.〔KeyWords〕Vancomycin;Resist

5、ance;Enterococcus;Phenotypes;Genotypes近年来万古霉素耐药肠球菌（Vancomycin-resistantenterococci,VRE）感染不断上升，美国2004年对670家医院的耐药监测显示VRE位于医院耐药菌第2位[1]。其耐药机制为细菌细胞壁结构改变，万古霉素与之亲合力下降，基因分型至少有vanA、vanB、vanC、vanD和vanE等型别。肠球菌可引起菌血症、心内膜炎以及泌尿系、腹腔和伤口感染。本实验采用多重PCR技术对肠球菌耐万古霉素基因进行了检测，以满足临床快速、特异的检测耐万古霉素基因

6、分布及流行病学研究。1材料和方法1.1菌株来源7标准菌株：ATCC29212（粪肠球菌）；参考菌株：vanA、vanB、vanC1和vanC2等4株VRE菌株均由上海第二医科大学附属瑞金医院惠赠。1.2抗生素纸片万古霉素、替考拉宁药敏纸片和Etest试纸条分别购自Oxoid和ABBiodisk公司。1.3主要试剂GPI鉴定卡购自生物梅里埃公司；M-H琼脂、脑心浸液培养基购自Oxoid公司；Taq酶及dNTPs等购自上海英俊公司；引物：vanA，vanB，vanC1和vanC23由上英俊公司合成。引物序列vanA：P1:5，-CATGACA

7、TATCGGTAAAATC-3，P2:5，-CATGACATATCGGTAAAATC-3，（885bp）；vanB：P1:5，-CATGATGTGTCGGTAAAATC-3，P2:5，-ACCGGGCAGRGTATTGAC-3，（885bp）；vanC1：P1:5，-GATGGCAGTATCCAAGGA-3，P2：5，-GTGATCGTGGCGCTG-3，（467bp）；vanC2/C3：P1:5，-GATGGCAGTATCCAAGGA-3，P2:5，-ATCGAAAAAGCCGTCTAC-3，（429bp）[2]。1.4主要实验仪器VI

8、TEK-32AMS微生物鉴定系统，生物梅里埃公司；DNA扩增仪，MJ公司；GeneGENIUS全自动凝胶图像分析系统，SYNGENE公司。1.5菌株鉴定用VITEK-32AMS微生物鉴定系统和