《IPTG诱导表达》PPT课件

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1、IPTG诱导表达原核基因的表达调控原核生物绝大多数基因按功能相关性成簇地串联、密集于染色体上，共同组成一个转录单位──操纵子，如乳糖（lac）操纵子、阿拉伯糖（ara）操纵子及色氨酸操纵子。操纵子机制在原核基因调控中具有较普遍的意义。原核生物的转录单位是操纵子，操纵子包括相关结构基因及其上游的调控序列。结构基因调控序列乳糖操纵子（元）调节机制乳糖操纵子调控区操纵序列O启动序列P调节基因I结构基因Z半乳糖苷酶Y透酶A乙酰基转移酶操纵子P：启动序列O：操纵序列I：调节序列IPOCAP调控区ZYX结构基因诱导物ZYXIPOCAP

2、ZYXIPOCAP乳糖（-）乳糖（+）要点阻遏蛋白的负性调节真正的诱导剂是半乳糖异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）pGEX-4T载体图谱IPTG诱导表达实验步骤第一天在超净台中将含有PGEX-4T-2空载体的甘油菌5ul接种在5ml的LB培养液中，摇床过夜。第二天将含有PGEX-4T-2空载体的过夜菌按照1:200比例接种至100mlLB中，37℃振荡培养2.5小时。留取1.5ml菌液作为未诱导培养的对照。在超净台中加入终浓度为0.4-1mM的IPTG于30℃诱导表达3.5小时。蛋白样品制备取1.5ml诱导后菌液及预先准备的未

3、诱导培养的菌液离心，将沉淀部分加入相同体积的蒸馏水与上样buffer，将蛋白样品于沸水中加热10分钟，离心取上清进行SDS-PAGE，检测融合蛋白的表达情况。开始转录TTGACAAACTGT-35区(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10区1-30-5010-10-40-205335原核生物启动子保守序列RNA-pol辨认位点(recognitionsite)55RNA聚合酶保护区结构基因33RNA转录起始-35区-10区TTGACATTAACTTTTACATATGATTTTACATA

4、TGTTTTGATATATAATCTGACGTACTGTN17N16N17N16N16N7N7N6N7N6AAAAAtrptRNATyrlacrecAAraBADTTGACATATAAT共有序列