幼鼠肠易激综合征模型建立及其发病机制的实验研究

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1、苏州大学博士学位论文幼鼠肠易激综合征模型建立及其发病机制的实验研究姓名：朱雪萍申请学位级别：博士专业：消化内科学指导教师：陈卫昌20070501幼鼠肠易激综合征模型建立及其发病机制的实验研究摘要法应用20只SD新生大鼠，随机分为IBS模型组和正常对照组，IBS模型组进行母子分离、改良机械束缚、结肠芥子油刺激等综合因素干预幼鼠建立IBS的动物模型；正常组不作干预。用自制的扩张器对幼鼠进行直肠扩张，评估不同压力下腹部收缩反射(AWR)阂值，测定幼鼠腹壁肌电活动；利用血管球囊扩张导管以5ml、10m1分别扩张IBS模型组、对照组幼鼠直肠，分别采集两组鼠脑部的

2、fMRI数据，采用脑功能成像分析软件进行数据处理，应用血氧水平依赖性功能性MRI(BOLD．fMRh技术，研究直肠球囊扩张刺激下肠易激综合征模型幼鼠脑内脏痛觉中枢兴奋情况及其兴奋区分布情况；取乙状结肠降段结肠用分层刮片技术刮取由外向内取1-4层细胞，丫啶橙荧光染色观察幼老细胞的比值并对肠粘膜上皮细胞进行美兰还原反应时间测定；并行结肠组织病理检测；干预后称两组幼鼠体重，观察粪便性状，查粪常规，并收集粪便称湿重和干重，应用Brist01分型观察各组粪便性状进行评分。结果直肠扩张时，在不同压力下模型组腹壁收缩反射(AWR)评分较对照组显著增加(P值均

3、1)；不同扩张压力下，腹壁肌电活动随压力增加明显增加(P<0．01)；直肠球囊刺激后可引起IBS模型组幼鼠脑内与内脏相关的脑区(脑岛皮质、额前皮质、丘脑及扣带前皮质)神经元活动增强，表现为高兴奋区，而对照组幼鼠无相应兴奋区表现；结肠黏膜分层刮片后丫啶橙染色见IBS模型组粘膜上皮最外层细胞幼老细胞比值较正常对照组明显减少，美蓝还原时间延长(P

4、、粪便常规检查两组间无明显差异。两组Brist01分型评分比较有显著性差异(P<0．05)。结论用母子分离、改良机械束缚、结肠芥子油刺激等综合因素干预幼鼠可成功建立适合儿童的幼鼠IBS动物模型，其机制可能为内脏敏感性增高。功能M对是一种较为直观且准确的观察脑功能活动的脑显像技术，本研究显示IBS幼鼠中枢内脑岛皮质、额前皮质及丘脑可能是参与内脏感觉的主要部位。幼鼠IBS模型结肠粘膜上皮细胞功能处于抑制状态。II幼鼠肠易激综合征模型建立及其发病机制的实验研究摘要第三部分ICC细胞和脑肠肽在幼鼠IBS模型中作用机制的实验研究目的旨在通过检测幼鼠结肠、脊髓和丘

5、脑组织中脑肠肽NPY和cGRP的mRNA表达和结肠ICC细胞c．kit阳性细胞的表达，探讨脑肠肽、脑肠轴及ICC细胞在幼鼠IBS模型发病机制中的作用。方法根据简单数字法随机将乳鼠分成IBS模型组和正常对照组二组，各10只。IBS模型组用母子分离、改良机械束缚、结肠芥子油刺激等综合因素干预的方法造模，对照组则不做任何干预。采用半定量逆转录多聚酶链式反应法检测二组幼鼠结肠、脊髓、丘脑组织中NPY和cGRPmRNA的表达。另取结肠组织通过免疫组化检测肌间ICC细胞c—kit阳性表达细胞数。结果IBS模型组中NPY在结肠、脊髓、丘脑组织中mRNA表达明显较正常

6、对照组降低，t值分别为9．66，8．55，12．65，(均P<0．01)；而cGRP则在脑肠轴各个层面(结肠、脊髓、丘脑)的表达中，IBS组明显较正常对照组增加，t值分别为14．41，12．85，12．41，(均P<0．01)。二组幼鼠结肠ICC细胞c．kit阳性表达细胞数有差异(t=5．294，P<0．01)。结论ICC细胞、脑肠肽可能在幼鼠IBS模型的发生、发展中起重要作用，本研究为深入研究儿童IBS发病机制提供了实验依据。第四部分马来酸曲美布汀干预幼鼠IBS模型的疗效观察目的探讨马来酸曲美布汀干预幼鼠肠易激综合征(IBS)模型后的治疗疗效。方法用

7、母子分离、改良机械束缚、结肠芥子油刺激等综合的方法建立幼鼠IBS模型共20只，随机选10只在干预同时用马来酸曲美布汀3mg／kg：d灌服治疗为治疗组，另10只为模型组，取同期正常生长幼鼠10只为正常对照组。分别对三组幼鼠行肛门直肠球囊扩张刺激下测腹壁肌电活动，AWR评分；处死后取结肠对其肠粘膜上皮细胞进行分层刮片、荧光染色和还原能力测定，RT—PCR检测结肠、脊髓、丘脑中NPY和cGRP的mRNA表达。结果IBS模型组和正常对照组间不同压力下AWR评分均有显著性差异(P<0．05)，而治疗组和正常对照组间差异无显著性(P>0．05)；在8mmHg压力时

8、，IBS模型组腹壁收缩次数增加达(6．65+1．04)次／3min，肌电图振幅增高，与另二组比