实验3琥珀酸脱氢酶的作用与

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1、实验三、琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察CompanyLogowww.themegallery.com上节课遇到的小问题：加热至沸时淀粉的螺旋结构完全破坏，蓝色便消失。一旦冷却螺旋结构恢复，蓝色重新呈现。CompanyLogowww.themegallery.com实验原理Contents实验试剂及仪器实验步骤及注意事项123CompanyLogowww.themegallery.com实验原理琥珀酸脱氢酶是位于动物细胞线粒体内膜上的一种氧化酶，它直接与电子传递链相连，是呼吸链的标志酶，亦即线粒体或细胞内三羧酸循环的一种标志酶。在体内，该

2、酶可使琥珀酸脱下的氢进入FADH2呼吸链，通过一系列传递体最后传递给氧而生成水。当在缺氧的条件下可用甲烯蓝(蓝色物质)作为受氢体时,甲烯蓝被氢还原成甲烯白(无色物质),其反应如下：CompanyLogowww.themegallery.comCompanyLogowww.themegallery.com实验原理根据这种蓝色转变为无色的变化过程，就可以判断出琥珀酸脱氢酶起了催化作用。丙二酸的结构与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争性结合琥珀酸脱氢酶的活性中心，从而抑制该酶的活性，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。这种抑制作用即属酶的竞争性抑制作用.由于甲烯白

3、容易被空气中的氧所氧化，所以实验需在无氧条件下进行。例如，用液体石蜡(或琼脂)封闭反应液，可以制造无氧环境。CompanyLogowww.themegallery.com实验试剂1.1.5%(m/V)琥珀酸钠溶液2.1%(m/V)丙二酸钠溶液3.0.02%(m/V)甲烯蓝溶液4.1/15mol/LNa2HPO4溶液5.液体石蜡油、洗净的石英砂CompanyLogowww.themegallery.comDiagram实验器材剪刀研钵恒温水浴锅离心机CompanyLogowww.themegallery.com实验步骤（1）猪心脏提取液的制备1称

4、取新鲜猪心脏2g放置研钵中剪碎。（2个组做一份，每个实验台的偶数组配平离心）2加入等体积的石英砂和1/15mol/LNa2HPO4溶液8ml（4g总共加），然后将之研磨成匀浆。（加足够石英砂，研磨要充分。）3再加入1/15mol/LNa2HPO4溶液12ml（4g总共加），充分混匀。4于2000rpm离心10min，取上清备用。（一定要将钢套和离心管套在一起配平，全班一起离心！）CompanyLogowww.themegallery.com实验步骤（2）取4支试管，按下表操作。（3）加好试剂后混匀，然后立即在各试管中加入一层（1-1.5cm高）

5、液体石蜡油。（4）将各管置37℃恒温水浴锅中保温，30min内观察各管颜色的变化。CompanyLogowww.themegallery.com实验原理比较颜色变化的速度，并试分析其原因。然后将第1支试管用力振摇，观察有何变化，观察并解释之。注：煮沸至心脏制备液自身沸腾5min即可。CompanyLogowww.themegallery.com注意事项1剪下的心脏组织须在天平上称量，研磨应充分至糊状，使琥珀酸脱氢酶尽量释放到溶液中。2滴加试剂时，尽量将各管的试剂加完全，最后再滴加心脏制备液。观察颜色变化时，应轻拿轻放，剧烈的振荡会使空气进入，造

6、成试验失败。3离心时，注意连同套筒在内的离心管一定要精确平衡，并将重量相同的离心管对称放置，以免产生的离心力不对称而损坏离心轴，造成严重事故。CompanyLogowww.themegallery.com预习实验：肝糖原的提取与鉴定下周上课交本次实验报告CompanyLogowww.themegallery.comHOOC—CH2—CH2—COOHHOOC—CH=CH—COOHFADFADH2甲烯白MBH2（无色）甲烯蓝MB（蓝色）琥珀酸脱氢酶丙二酸HOOC—CH2—COOHCompanyLogowww.themegallery.com甲烯蓝，

7、又名亚甲蓝，美蓝CompanyLogowww.themegallery.com服务理念中的“点点”◆理解多一点真情浓一点◆学习勤一点品质高一点◆理由少一点效率高一点◆处理问题灵活点工作过程用心点◆对待同事宽容点互相协作快乐点放映结束！敬请各位的批评指导！谢谢观看