琥珀酸脱氢酶作用及竞争抑制的观察

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1、1•琥珀酸脱氢酶作用及竞争抑制的观察2•紫外分光法测定核酸含量本实验分组为15组，如果为16组，相应材料要增加。需要的试剂配制方法注意事项1.5%琥珀酸钠溶液7.5g琥珀酸钠一500ml-15小瓶没冇琥珀酸钠则用琥珀酸代替后用NaOH调和至PH7.01%丙二酸钠5g内二酸钠一500ml-15小瓶没有丙二酸钠则用丙二酸代替后用NaOH调和至PH7.00.02%甲稀蓝O.lg甲稀蓝-*500ml-*15小瓶（棕色瓶）甲稀蓝别名亚甲酰蓝l/15mol/LNa2HPO423.6gNa2HPO4-2000m

2、l-15大瓶石蜡油可以不用分装每个房间在水浴锅前放1个核酸称一淀量的小牛胸腺DNA融入0.1%的NaOH5-50ug/mL浓度羊的心脏切碎成小块大约2g左右提前购买，将皮、脂肪处理掉分割后放在冰箱里石英砂均匀的撒在上面注：每三个人一组，分为15纽。如果人数多可以适当多分几瓶试剂。所需仪器所需数量40ml试剂瓶4560ml试剂瓶15试管①4x1502x15共90个移液管（优先10ml的本次用5ml移液管）15研钵15胶头滴管共力个种类数量心脏提取液151.5%琥珀酸钠151%丙二酸钠150.02%甲

3、稀蓝15蒸馅水15液体石蜡2紫外吸收法测定核酸含量一、实验H的：1.掌握紫外吸收法测定核酸含量的原理2.掌握利用紫外线分光度计测定核酸含量二、实验原理：DNA和RNA都冇吸收紫外线的性质，授大吸收峰在260nm波长处紫外线吸收是喋吟、II密喘碱基貝•有共轨双健系统(一C=C—C=C一)，能够强烈吸收250^280nm波长的紫外光。等书上112页三、实验试剂与器材DNA样品紫外分光光度计四、实验步骤1•取DNA样品5m1,于紫外分光光度计上测定260nm与280nm处的0D值按下式按下式计算核酸浓度

4、①计算核酸浓度DNA的质量浓度(mg/l)=0D260nm/0.020xLx稀释倍数②计算核酸纯度=0D260nm/0D280nm2.取DNA样品5ml，沸水浴中加热5min于紫外分光光度计上，测260nm处的0D值比较DNA前后吸光度0D的差异。五、实验结果与分析备注：紫外光区：100400nm可见光区：400-700nm红外光区：700500um比色杯：玻璃比色杯(glass,G)：仅用于可见光区石英比色杯(silici,S)：用于可见、紫外光区。比色杯清洗：不能丿IJ碱性试剂洗涤，川弱酸性试

5、剂洗涤，或者去污剂洗涤。琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察一、实验目的掌握酶的竞争性抑制作用的原理及测控方法二实验原理琥珀酸脱氢酶是三竣酸循环中的一个重要的酶,测定细胞中有无这种酶可以初步鉴定三竣酸循环途径是否存在。琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢，产生的氢可通过一系列传递体最后递给氧而生成水。在缺氧的情况下,若有适当的受氢体也可显示出脱氢酶的作用。如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作甩琥珀酸-甲

6、烯蓝琥珀酸脱氢酶延胡索酸-甲烯白无氧条件~k丙二酸的化学结构与琥珀酸相似尼能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合,则不能再催化琥珀酸脱氢,这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用。（参考上届实验报告写公式）实验试剂与器材羊心脏、1.5%琥珀酸钠溶液、1%丙二酸钠溶液、0.02%甲烯蓝溶液、l/15mol/LNa2HPO4溶液、液体石蜡。实验步骤L称取新鲜羊4L'1.5g放研钵中，加入等体积的石英砂及l/15mol/LNa2HPO4溶液2m

7、l,捣碎成浆，再加入4mll/15mol/LNa2HPO4溶液，放置30分钟f不时摇动，于2000r/min离心取上清液备用。单位：滴试管号心脏提取液1・5%琥珀酸钠1%丙一酸钠蒸憎水0.02%甲稀蓝155—25225525235205524555202注：充分摇匀，加l-1.5cm高的石蜡。37。（：水浴观察颜色变化3将第一只试管用力摇动观察有无变化。五、注意事项要充分摇匀，覆盖石蜡油后，观察时切勿摇动。六、实验结果与分析