一种CAST基因过表达小鼠建立

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1、钙蛋白酶抑制蛋白基因过表达Balb/C小鼠的繁育及鉴定虞勇，李明辉，刘桂剑，李冰玉，邹云增，陈瑞珍*（复旦大学附属中山医院心血管病研究所实验室，上海200032）[收稿日期]2016-02-03[接受日期]2016-06-04[基金项目]国家自然科学基金(31070786).SupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina（31070786）.[作者简介]虞勇，主管技师.E-mail:yu.yong1@zs-hospital.sh.cn*通信作者(Corresp

2、ondingauthor).Tel:021-64041990*8543,E-mail:chen.ruizhen@zs-hospital.sh.cn[摘要]目的：建立Balb/C小鼠遗传背景的钙蛋白酶抑制蛋白（Calpastatin,CAST）基因过表达小鼠的培育方法，并探讨碱性裂解液提取基因组DNA在子代鼠基因型鉴定中的应用价值。方法：将雄性C57BL/6-CAST+/-转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠杂交，子代小鼠中取雄性鉴定为CAST+/-杂合子小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠杂交，连续杂交直至消除C5

3、7BL/6小鼠遗传背景。取子代小鼠鼠尾组织，采用碱性裂解液提取基因组DNA，PCR法扩增CAST基因片段，琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。采用柯萨奇B3病毒（CVB3）感染Balb/C-CAST-/-小鼠以建立急性病毒性心肌炎小鼠模型。结果：C57BL/6-CAST+/-转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠连续杂交10代可消除C57BL/6小鼠遗传背景。采用碱性裂解液提取的基因组DNA数量、纯度能夠满足后续实验需要，且产物大小与目的片段一致。成功建立Balb/C-CAST-/-基因型小鼠急性病毒性心肌炎模型。结论：成功

4、建立Balb/C-CAST基因过表达小鼠，为后续研究奠定了基础；碱性裂解液提取基因组DNA简单、高效，值得推广。[关键词]钙离子依赖性蛋白酶；钙蛋白酶抑制蛋白；柯萨奇B3病毒；转基因；基因型鉴定[中图分类号]R[文献标志码]ABreedingofcalpastatingeneoverexpressionandidentificationinBalb/CmiceYUYong,LIMing-hui,LIUGui-jian,LIBing-yu,ZOUYun-zeng,CHENRui-zhen*Laboratoryofc

5、ardiovasculardiseaseresearchinstitute,ZhongshanHospital,FudanUniversity,Shanghai200032,China[Abstract]Objective：Toestablishmethodsforthebreedingofcalpastatin(CAST）geneoverexpressionmiceonBalb/Cbackgroundandtoinvestigatetheapplicationofalkalinelysissolutionext

6、ractedgenomicDNAingenotyping.Methods：Tg-C57BL/6-CAST+/-malemicewerebackcrossedtoBalb/Cwildtypefemalemice.Inthefilialgenerations,CAST+/-heterozygousmalemicewerebackcrossedtoBalb/Cwildtypefemalemiceformorethan10generationstoremoveC57BL/6geneticbackground.Then,B

7、alb/C-CAST-/-micefromthesamebroodwereinfectedwithcoxsakievirus（CVB3）toestablishthemousemodelofacuteviralmyocarditis.GenomicDNAwasisolatedfromfilialgenerationmicetails.ThenCASTgenefragmentwasamplifiedbyPCR.Results：Thereproductionofthefilialgenerationswithdiffe

8、rentphenotypes(CAST+/-,CAST-/-)isbasicallyinaccordancewithMondel'sGeneticsLaw.ToremoveC57BL/6geneticbackground,CAST+/-heterozygousmalemiceshouldbebackcrossedtoBalb/Cwildtypefemalemicefora