蝴蝶兰生产技术规程

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1、Q/JJS0001—2007河南省质量技术监督局发布2009-12-30实施2009-12-01发布蝴蝶兰组织培养技术规程DB41/T602—2009DB41河南省地方标准IDB41/T602—2009前言为规范河南省境内蝴蝶兰的组织培养技术，结合我省生产实际和地域特点，制订本地方标准。本标准附录A、B为规范性附录，附录C为资料性附录。本标准由河南省济源市农业科学研究所提出并起草。本标准主要起草人：王梅、钟士传、李铭、陈丽、牛小沛、刘星明、陈火星。本标准于2009年12月01日发布。IDB41/T602—2009蝴蝶兰组织培养技术规程1范围本标准规定了蝴蝶兰的组织培

2、养技术相关定义、设施设备、组培技术、炼苗移栽等内容。本标准适用于河南省境内的蝴蝶兰组织培养。2定义下列定义适用于本标准。2.1植物组织培养从植物体分离出符合需要的器官、组织或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。2.2外植体由活植物体上切取下来以进行培养的器官、组织或细胞、原生质体。2.3培养基供植物外植体存活和生长所必需的介质，通常由水、无机盐、有机物质、凝固剂、糖以及植物生长调节物质等组成。2.4初代培养接种外植体后继代培养之前的培养。2.5继代培养对来自于初代培养获得的芽、原球茎等，通过

3、分离切割并更新培养基，使培养材料数量上增加，并得到无根的幼苗。2.6生根培养把无根的幼苗转接到生根培养基中诱导生根，培养成生根苗的过程。2.7炼苗在保护设施中，采取逐步通风、控温、遮光等措施，使幼苗适应外界环境的过程。2.8变异在组织培养过程中受培养基和培养条件等影响，从外部形态上表现出有别于原品种的现象。3设施设备3.1组培设施与设备3.1.1组培设施一般由洗涤室、灭菌室、培养基配制室、无菌接种室、培养室、炼苗室组成。8DB41/T602—20093.1.2仪器设备3.1.2.1洗涤室主要有自动或半自动洗瓶机、水槽、塑料箱、干燥箱、晾瓶架等。3.1.2.2灭菌室主

4、要有高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外灯、烘干箱、微孔滤器等。3.1.2.3培养基配制室主要有电子天平(0.0001g、0.01g)、量筒、微波炉、冰箱、移液管、烧杯、酸度计、容量瓶、药品柜、实验台等。3.1.2.4无菌接种室主要有超净工作台、或酒精灯、剪刀、镊子等。3.1.2.5培养室主要有培养架、紫外灯及控温、控湿、控时设备等。3.2炼苗移栽设施3.2.1温室要求冬季能加温，夏季能降温，能控制光照、温度、湿度等的日光温室、玻璃温室或PC板温室等。3.2.2温室设施主要有栽培床、灌溉设备、穴盘等。4组培技术4.1母株选择应选择观赏性状好、生长健壮、无病虫害、花期长的

5、优良品种。4.2培养基配制及灭菌4.2.1培养基的选择常用MS和花宝培养基。4.2.2母液配制MS培养基一般由大量元素、微量元素、铁盐、有机物、调节物质等五大类。成分及用量见附录A。花宝培养基不用配制母液，直接使用。4.2.3培养基的配制4.2.3.1配料按培养基的配方及所需培养基的数量，分别吸取所需的母液及生长调节物质，加入称量好的蔗糖、琼脂以及其它需要的物质，如活性炭等，混合后倒入煮培养基的锅中，并加入少量的蒸馏水。4.2.3.2装瓶加热培养基至琼脂完全溶化，用蒸馏水将培养基定容至所需体积，并用1mol/LNaOH溶液或1mol/LHCl溶液调节pH。趁热把煮好

6、的培养基分装入培养瓶，盖上培养瓶盖。分装时应不断搅拌，并不要把培养基沾附在瓶口。4.2.3.3灭菌将分装好的培养基放入高压灭菌器内，采用湿热空气灭菌法（灭菌压力0.11MPa～0.14MPa、温度120℃～126℃、时间15min～20min）进行灭菌。无菌水、接种工具（手术刀、镊子、垫纸等）也均采用此法灭菌。培养基高压灭菌取出后，置于室温至培养基凝固后即可使用。4.3外植体选择与处理4.3.1花梗侧芽选择与处理选取已开有少数花的健壮花序，切取带有芽的花梗节段，将其进行冲洗，用10%的漂白粉溶液表面灭菌20min，除去腋芽的苞叶，再在5%的漂白粉溶液中表面灭菌3mi

7、n，无菌水冲4次～5次。4.3.2种胚培养选择与处理8DB41/T602—20094.3.2.1种胚来源4.3.2.1.1授粉条件人工授粉时,首先要选好亲本,雌花最好的授粉时间是开花3d～4d。4.3.2.1.2授粉过程授粉时先将母本的花粉块除去,再将父本的花粉块用小镊子镊起,轻轻地放在母本的蕊腔上,因蕊腔中有粘液将花粉块粘附,不必担心花粉块脱落。4.3.2.1.3果实采收杂交后120d左右，当果实呈黄绿色时及时采收。4.3.3无菌处理果实采收后，用流动水冲洗干净，移到超净工作台上，用75%酒精浸泡8min～10min，再用10%漂白粉溶液中浸10min，然后用