实验七环境因素对微生物的影响

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实验七、环境因素对微生物的影响----温度、渗透压、生物因素、紫外线及消毒剂对微生物的影响 一实验目的1.了解温度对微生物生长的影响；2.了解渗透压对微生物的影响；3.了解抗生素（青霉素、氨苄青霉素）的抗菌范围，学习抗菌谱试验的基本方法。4、了解消毒剂对微生物分布的影响。5、了解紫外线杀菌对微生物的作用特点 二实验原理1.温度:温度是影响微生物生长与存活的最重要因素。自然界的微生物可根据对温度的适应性分为低温型、中温型和高温型。但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温度范围。分为最高、最适和最低生长温度。在最适宜温度里生长良好：超过最高温度细胞死亡；低于最低温度细胞被抑制或死亡。 温度对微生物影响的实际应用：应用上利用高温进行杀菌；低温抑制微生物；最适温度培养微生物的活动。 2.渗透压的影响：在等渗溶液中，（环境渗透压和细胞内渗透压相同或相近，细胞在等渗环境中生长好，如0.85％氯化钠——生理盐水），微生物正常生长。在高渗溶液（如高盐、高糖溶液中），细胞失水收缩，从而抑制了微生物体内的生理生化反应，抑制其生长繁殖。而在低渗溶液中，由于细胞壁的保护作用，微生物受低渗的影响不大。 大多数微生物在0.5～3％的盐浓度范围内可正常生长；10～15％的盐浓度能抑制大部分微生物的生长；但对嗜盐细菌而言，在低于15％的盐浓度环境中不能生长；某些极端嗜盐菌可在盐浓度高达30％的条件下生长良好。 本实验选择了金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为实验菌种，其中大肠杆菌耐高渗透压的能力较差，在3%以下的NaCl下能正常生长，以5%的NaCl下即受到抑制；金黄色葡萄球菌有较强的耐盐能力，它在10~15%的NaCl溶液中仍能正常生长，因此实验选择了0.85%、5%、10%和20%的NaCl溶液浓度作为实验浓度。 3.生物因素对微生物生长的影响：抗生素是某些微生物在生长代谢过程中产生的能抑制或杀死其它微生物的次生代谢产物。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌谱。例如青霉素只对革兰氏阳性菌具有抗菌作用；多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为广谱抗生素。 本实验中用到的氨苄青霉素：对青霉素敏感革兰氏阳性球菌、变形杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌、产气荚膜杆菌；大肠杆菌及流感杆菌等都有很好的抗菌效果。 4、化学消毒剂对微生物分布的影响人体皮肤分布着一定种类与数量的微生物。使用化学消毒剂对皮肤进行表面消毒是医院里进行无菌操作常用的方法之一。 5、紫外线的杀菌作用波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌能力最强。其杀菌机理是抑制DNA复制，以及产生臭氧和H2O2而产生一定的杀菌作用。但紫外线穿透力弱，一般适用于表面消毒和空气消毒。 三、实验步骤1.温度对微生物生长的影响：A.菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌；B.取肉汤培养基5支；C.分别接种大肠杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌各2支试管，余下一支不接种作阴性对照；D.分别取接种的培养基各1管，于100℃作用15min后取出，37℃培养；E.培养24h后观察现象。 2.渗透压对微生物生长的影响：A.菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；B.取一块LB平板，将其分成两个区，分别接种划线大肠杆菌和金黄色葡萄球菌；C.取一块含Nacl浓度为5％、10%和20%的肉膏蛋白胨平板，将其分成两个区，分别接种划线大肠杆菌和金黄色葡萄球菌；D.将三块接种好的平板于37℃培养24h后观察现象。 3.生物因素（抗生素）对微生物生长的影响A.菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌B.用接种环刮取一环菌体，轻放在平板上；C.将无菌的棉签在无菌水中润湿；D.用湿润的无菌棉签将平板上的菌体均匀涂布； E.用无菌镊子取青霉素药敏片，贴在LB平板上注意：在贴滤纸条时不要在培养基上拖动滤纸条，避免抗生素溶液在培养基中扩散时分布不均匀。F.重复上述操作，2次（2种不同的菌）G.平板于37℃培养24h后观察实验现象 4、化学消毒剂对微生物分布的影响A.两名同学用1个营养琼脂平板，将平板分为两个区域；B.一名同学直接用手指在平板的一半划之字形，另一半用碘酒/酒精消毒后，稍候片刻，再在另外一半划之字形；C.平板于37℃培养24h后观察实验现象 5、紫外线的消毒作用A.菌种：大肠杆菌B.用接种环刮取一环菌体，轻放在平板上；C.将无菌的棉签在无菌水中润湿；D.用湿润的无菌棉签将平板上的菌体均匀涂布；E.将平板半盖上置于紫外灯照射30min;F.平板于37℃培养24h后观察实验现象 习题如果抑菌带隔一段时间后又长出少许菌落，你如何解释这种现象？