基因工程载体人工染色体载体

《基因工程载体人工染色体载体》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第三节其他载体2012.09其他载体一、人工染色体二、植物基因工程载体三、动物基因工程载体一、人工染色体人基因组十分庞大，约含4×109bp，建立和筛选人的基因组文库，要求有容量更大的载体，酵母人工染色体（yeastartificialchromosome,YAC）载体应运而生。YAC含有酵母染色体端粒（telesome）、着丝点(centromere)及复制起点等功能序列，可插入长度达200-500kb的外源DNA，导入酵母细胞可以随细胞分裂周期复制繁殖供作克隆，成为人基因组研究计划的重要1、酵母人工染

2、色体（yeastartificialchromosome,YAC)酵母人工染色体（yeastartificialchromosome，YAC）◆酵母人工染色体是另一类酵母穿梭载体。具有自主复制序列、克隆位点以及可在细菌和酵母菌中选择的标记基因。◆YAC可以接受100-1000kb的外源DNA片段，这一特点使YAC成为人类基因组计划及图位克隆分离基因的重要工具，并促进了发展人类人工染色体(humanartificialchromosome，HAC)的研究。正常酵母人工染色体含有：*四膜虫端粒（tel)*酵母

3、自主复制序列（ARS)*酵母着丝点(CEN)*酵母的选择标记(TRP1、URA1)YAC载体thecapacitytoclonelargeexogenousDNAfragments(upto2Mb)hasmadeYACsavitaltoolinphysicalmappingThefunctionalelementsofayeastchromosome（1）着丝粒区（CEN）AAGTCACGTGTTGTTTCTGNTTTCCGAAAYAC的组成结构酵母染色体着丝粒区的保守序列:78-86bpIIIIII由三

4、个区组成酵母端粒保守序列是(G4T2)n重复序列。（3）复制起点（ORI）约100bp的自主复制序列（ARS）。（2）端粒（TEL）（真核生物中只有酵母菌有ARS）两个端粒序列Tel。位于SUP4基因内部。（4）克隆位点插入失活选择：SUP4酶失活的酵母菌落呈红色；不失活的菌落是白色。142、细菌人工染色体（Bacterialartificialchromosome,BAC）细菌人工染色体（bacterialartificialchromosome，BAC）◆BAC载体是基于细菌的性因子(F因子)质粒的一

5、些特点构建的。F因子在细菌接合时转移1Mb的细菌染色体片段。将F因子经基因工程改良构成的BAC载体，可用于克隆100kb以上的DNA片段。◆带有外源片段的BAC载体在细菌细胞中通常仅单个拷贝，这一特点有利于保持DNA大分子，在细胞内稳定复制而不发生重组。BAC载体本身分子量小，具有氯霉素抗性选择基因及多克隆位点。Structureofabacterialartificialchromosome(BAC),usedforcloninglargefragmentsofdonorDNA.CMRisaselect

6、ablemarkerforchloramphenicolresistance.oriS,repE,parA,andparBareFgenesforreplicationandregulationofcopynumber.cosNisthecossitefromlphage.HindIIIandBamHIarecloningsitesatwhichforeignDNAisinserted.Thetwopromotersarefortranscribingtheinsertedfragment.TheNotI

7、sitesareusedforcuttingouttheinsertedfragment.3、PAC载体二、植物载体PlantcloningvectorsTi质粒:侵染广泛的双子叶植物T-DNA或T-区(T-region)：约20kb，包含专化冠瘿碱生化合成和冠瘿瘤生长的基因，随机地整合到植物染色体上。结构特点：两端具有25个碱基对的顺向重复序列，但重复不是完全的。25个碱基对的序列称为T-DNA的边界序列(T-DNAbordersequence)。去除右边界序列，将使T-DNA失去转移和整合的功能；左边

8、界的缺失，对致瘤性无明显影响。毒性区域即vir(virulence)区域:引起T-DNA转移的区域。长度约35kb，和T-DNA处于不同位置植物Ti质粒载体（1）T-DNA区（transferred-DNAregions）T-DNA是农杆菌侵染植物细胞时，从Ti质粒上导入植物细胞的一段DNA。T-DNA两端各有一段25bp的重复序列(LB,RB)。T-DNA携带的致瘤基因是一些与激素合成有关的基因，由于激素合成基因使细胞处于不