基因工程的基本程序丁

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1、基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达获得符合人们需要的新产品对基因进行操作的“手术刀”、“缝合针”、“运输工具”分别是什么物质？有何作用？基因工程的剪切、拼接、导入、表达的具体过程是怎么样的呢？基因工程的基本操作程序（一）基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定剪切：拼接：导入：表达：一、目的基因的获取目的基因：主要指编码蛋白质的结构基因.例如：苏云金杆菌抗虫基因人胰岛素基因种子贮藏蛋白基因植物抗病基因…

2、…什么是目的基因？目的基因的来源？1、从自然界中已有的物种中分离2、人工方法合成获取目的基因的常用方法：1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因获取目的基因的常用方法：1、从基因文库中获取目的基因什么是基因文库？将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？提示：如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体

3、发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。基因文库种类基因组文库：含有某种生物的全部基因部分基因文库（如cDNA文库）：含有某种生物的一部分基因如何构建基因组文库和部分基因文库呢？限制酶基因组DNA基因重组转化细菌体外包装1)基因组文库●基因文库提取某种生物的全部DNA限制酶切割一定大小的DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库2)部分基因文库（cDNA文库）基因重组反转录酶mRNAcDNA某种生物的单链mRNA反转录酶互补的单链DNADNA聚合酶双链CDNA片段与载体连接导入受体菌种储存CDNA文库如何从

4、基因文库中获取所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性。2、利用PCR技术扩增目的基因——一段已知的目的基因序列通过2n形式扩增获取大量的目的基因DNA复制（体外）碱基互补配对原则4种脱氧核苷酸PCR仪Taq酶（耐热的DNA聚合酶）、引物等目的：原理：原则：原料：场所：条件：过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部_____

5、___。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链质粒DNA分子限制酶处理一个切口形成两个黏性末端或平末端两个切口获得含有相同黏性末端的目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种二.基因表达载体的构建(一)过程:科学家在培育抗虫棉时，经历了多次失败，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。

6、科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。资料:作为基因表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？基因表达载体的组成：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因复制原点阅读与思考：①启动子、终止子有何作用？②标记基因有什么作用？启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA

7、片断，能终止mRNA的转录标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来启动子与起始密码子？终止子与终止密码子？启动子和终止子：DNA上启动子：驱动转录终止子：终止转录起始密码子和终止密码子：mRNA上起始密码子：驱动翻译终止密码子：终止翻译阅读与思考：基因的运载体、目的基因、启动子、终止子等都是DNA片断，如何将它们连接起来？载体与表达载体的区别？二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构用到的工具酶？既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，

8、两种酶作用