仲景合法方对bcg-lps所致小鼠免疫性肝损伤免疫功能影响

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1、仲景合法方对BCG/LPS所致小鼠免疫性肝损伤免疫功能影响摘要：目的：探讨仲景合法方抗卡介苗(BCG)／脂多糖(LPS)免疫性肝损伤小鼠的免疫保护机制。方法：实验第1天小鼠尾静脉注射BcGlmg，12天后再尾静脉注射lpS1110ug以制造免疫性肝损伤模型。造模同时，用药组给以仲景合法方不同剂量连续灌胃，连续12天。通过测定转氨酶、摘取胸腺称重，计算胸腺指数；wrr比色法检测T、B淋巴细胞增殖能力、绵羊红细胞吞噬法测定腹腔巨噬细胞吞噬能力、亚硝酸盐测定法测定NO诱生能力。生物活性法检测脾细胞产生Th

2、l型细胞因子IFN―Y的能力，同时分离血清，用EusA法检测th2型细胞因子IL－4的含量。结果：仲景合法方有不同程度对抗BcB／lps对胸腺的抑制作用，其中剂量效果最佳，而阳性对照药物联苯双酯则无效果。仲景合法方中剂量组则能对抗BcB／lps的T、B淋巴细胞增殖作用。能够不同程度抑制T、B淋巴细胞转化、成熟。从巨噬细胞吞噬能力指标的检测中也发现，仲景合法方既能对抗BcB／LPS抑制巨噬细胞吞噬的作用，又能提高正常组的巨噬细胞吞噬能力，并促进NO的表达。仲景合法方降低损伤肝脏Ifn－y(thl细胞因

3、子)含量，也降低IL－4(细胞因子)含量，使11ll／Tb2平衡向thl漂移回至正常。结论：仲景合法方对免疫性肝损伤小鼠具有保护作用。并能调节免疫功能。关键词：仲景合法方；免疫性肝损伤；卡介苗；脂多糖中图分类号：R－33文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01―0069－04病毒性肝炎现已成为严重影响人民健康的重大疾病。现代研究表明，免疫损害机制在病毒性肝炎发病和慢性化过程中起到主要作用。张仲景《伤寒论》和《金匮要略》中的小柴胡汤、茵陈蒿汤、大黄廑虫丸、黄芪建中汤4方，是一系列临

4、床疗效奇佳的经方，它们广泛用于治疗各种肝胆系统疾病。本研究从这4方和、清、消、补的治法出发，配合仲景肝病传脾的见解，各取小柴胡汤、茵陈蒿汤、大黄廑虫丸、黄芪建中汤中主要药物，组成一首融仲景四法于一方的合法方剂，探讨其对免疫性肝损伤小鼠免疫功能的影响。1　资料与方法1.1　实验动物昆明雄性小鼠，体重(18±0.5)g，购自中国医学科学院实验动物研究所。111.2　药物与试剂(1)中药水煎剂制备：中药购自北京中医药大学国医堂。由北京中医药大学实验中医教研室提供。(2)联苯双脂，北京协和药厂。卡介苗(BC

5、G)由卫生部北京生物制品所提供。小鼠血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。细菌脂多糖(lps)：Sigma公司出品。Trls－NH4C1溶液。RPMI－1640培养液。PBS缓冲液，购自北京鼎国生物制品公司。1.3　主要器材　低温离心机，SCB20BA型，日本产。倒置显微镜：Olympus，IMT－2型，日本产。cO2恒温培养箱：RKI10001B型，日本产。单道加样器：20、200、1000uL，Fj－nnpipette牌，芬兰产。24孔.96孔平底细胞培养板，Custa

6、r，美国产。1.4　动物分组　昆明雄性小鼠随机分成6组，每组10只。每只小鼠尾静脉注射BCGling。12天后再尾静脉注射LPS101.tg以制造免疫性肝损伤模型。制造模型同时给药，分另4为正常对照组，BCG+LPS模型组，联苯双酯阳性药对照组，中药大剂量+BCG／LPS组，中药中剂量+BCG／LPS组，中药小剂量+BCG／LPS组；后3组分别灌胃中药0.2g／10g、0.15／10g和0.055／108,0.2mL／只，共12天，联苯双酯阳性药对照组灌胃联苯双酯150m#kg，0.2mL／只灌胃，

7、正常组和模型组分别用蒸馏水灌胃0.2mL／只。111.5　取材方法　以上各组小鼠尾静脉注射LPS后24h后摘眼球放血处死，离心血清，检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)；取血后小鼠脱颈处死，无菌抽取腹腔液及摘取脾脏，测定巨噬细胞吞噬能力、NO生成能力和T、B细胞转化率；然后摘取胸腺，称重计算胸腺指数(胸腺指数=胸腺重量／体重)。1.6　血清ALTAST活性的测定采用ALT、AST测定试剂盒，在TRACECBl71自动生化分析仪上测定(日本岛津)。1.7　脾TB淋巴细胞增殖能力的测定

8、采用MIT比色法：无菌摘取脾脏，研磨，过200目细胞筛，1500r／min离心10mln，加.&Tris―NH,Cl溶液破坏红细胞，用不含小牛血清的RPMI1640培养基洗细胞2次，用含10％小牛血清的RPMI1640培养基重悬细胞，显微镜下计数，调细胞浓度至5×106／mL，加人96孔细胞培养板100p,L／孔，再分别加入ConA100Ful／孔使其终浓度为6ug／mL，测T淋巴细胞转化率，加入LPSlood,使其终浓度为10ug／mL，测B淋巴细胞转化率。将上述加