生物产品降解霉菌毒素功效评价技术规范征求意见稿.docx

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1、发布GB/TXXXXX—201X中华人民共和国国家标准ICS07.080A21生物产品降解霉菌毒素功效评价技术规范Technicalspecificationsforefficacyevaluationofmycotoxindegradationbybiologicalproduct（征求意见稿）发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会201X-XX-XX发布201X-XX-XX实施1GB/T××××—201×前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：本标准主要起草人：GB/T××××—2

2、01×4GB/T××××—201×生物产品降解霉菌毒素功效评价技术规范1范围本标准规定了生物产品降解霉菌毒素的功效评价原理、试剂与材料、仪器设备与器具、分析步骤和结果分析。本标准适用于微生物和酶生物产品降解霉菌毒素的效果评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法GB/T17480-2008饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法GB5009.209-2016食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯

3、酮的测定3术语与定义下列术语和定义适用于本文件：3.1降解率degradationrate降解实验前后，样品中霉菌毒素含量差与样品中初始浓度的比值，用百分数表示。4原理具有霉菌毒素降解功效的生物产品，与加入的霉菌毒素进行混合培养后，体系中游离的霉菌毒素含量发生变化，通过测定培养周期内培养液中霉菌毒素的减少量，计算霉菌毒素的降解率，从而评价生物产品对霉菌毒素的降解功效。5试剂和材料除特殊说明外，本标准所用试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的二级水。5.11mg/mL黄曲霉毒素B1标准品溶液准确称取5mg黄曲霉毒素B1标准品，用5mL甲醇（5.1）溶解，临用前现配。5

4、.21mg/mL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品溶液准确称取5mg脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品，用5mL甲醇（5.1）溶解，临用前现配。4GB/T××××—201×5.31mg/mL玉米赤霉烯酮标准品溶液准确称取5mg玉米赤霉烯酮标准品，用5mL甲醇（5.1）溶解，临用前现配。5.4霉菌毒素试验溶液配制将霉菌毒素标准品溶液，用甲醇10倍梯度稀释，配制成终浓度为10μg/ml的试验溶液，备用。5.5基础营养基溶液准确称量20g葡萄糖，15g蛋白胨，5g氯化钠，0.5g牛肉膏，纯水定容至1L，pH7.1。基础营养基溶液121ºC，30min灭菌后待用。5.60.01M磷酸盐缓冲液，pH7.4准

5、确称量9gNaCl,0.296gNaH2PO4,2.9gNa2HPO4·12H2O溶于纯水中，用纯水定容至1L。5.7酶联免疫吸附试剂盒黄曲霉毒素B1酶联免疫吸附试剂盒，试剂盒灵敏度为0.03ng/ml；脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫吸附试剂盒，试剂盒灵敏度为4ng/ml；玉米赤霉烯酮酶联免疫吸附试剂盒，试剂盒灵敏度为0.2ng/ml。6仪器和设备6.1电子分析天平：精度为0.1mg。6.2移液枪：规格20μL，200μL，1000μL，5000μL。6.3恒温水浴锅:温度控制范围在30℃-60℃之间，精度为0.1℃。6.4全自动酶标仪:带450nm滤光片。6.5离心机：相对离心力

6、≥4000g。6.6生化培养箱：温度控制范围在5℃-45℃之间，精度为0.1℃。6.7压力蒸汽灭菌锅：额定温度126℃，额定压力0.14MPa。7试验步骤7.1试验设计不同类型生物产品降解霉菌毒素功效试验设计应符合表1要求表1生物产品降解霉菌毒素功效试验设计项目产品种类微生物产品酶产品处理设计1.供试样品2.失活样品3.空白对照4GB/T××××—201×重复次数不少于3次7.2供试样本处理7.2.1供试微生物样本处理将供试微生物接种到含有200mL基础营养基溶液（5.4）三角瓶中，生化培养箱120rpm/min条件下37℃振荡培养36h，即得供试微生物液体样本。7.2.2供试

7、酶制剂样本处理准确称取1g酶制剂，用50mL0.01MpH7.4磷酸盐缓冲液(5.5)溶解，即得供试酶制剂液体样本。7.3失活样品处理取一半处理好的供试样品进行121ºC，30min杀菌处理，即得失活样本。7.4降解处理试验7.4.1微生物降解处理分别取18mL基础营养基溶液（5.4），供试样品和失活样品菌液上清加入降解瓶中。再分别加入需降解的霉菌毒素试验溶液（5.3）2mL，32℃，120rpm/min条件下振荡培养48h，分别取100μL降解液待测。7.4.2酶制剂降解处理分别取18mL