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1、实用标准文案实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用摘要:实时荧光定量PCR技术通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已在动植物基因工程,微生物和医学领域中得到广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理，检测方法的原理、优缺点进行了评述,重点及创新点是对实时荧光定量PCR技术在医学领域，食品行业，植物方面的应用进行了比较全面的综述,并对实时荧光定量PCR技术的普及应用及领域的前景做了进一步的展望。关键词：实时荧光定量PCR；应用；展望Re
2、searchprogressandapplicationofreal-timePCRtechnologyAbstract:Real-timePCRtechnologytodetectPCRproductbyfluorescencequantitativesignalstrengthtoachievethepurpose,thetechnologynotonlytoachievethePCRfromqualitativetoquantitativeleap,andcomparedwithconventionalPCR,itismorespecific,effectivesolut
3、iontoPCRcontaminationproblem,degreeofautomation,hasbeenwidelyusedingeneticengineeringofplantsandanimals,microbesandmedicinefields.Inthispaper,theprincipleofreal-timePCRtechnology,principles,testingmethods,advantagesanddisadvantagesarereviewed,thefocusandinnovationisareal-timePCRtechnologyint
4、hefieldofmedicine,foodindustry,plantaspectsoftheapplicationofamorecomprehensiveoverview,prospectsandreal-timePCRtechnologyinthefieldofuniversalapplicationandmadeafurtheroutlook.Keywords:Real-timequantitativePCR;application;Outlook文档实用标准文案聚合酶链反应(PCR)技术自1985年问世以来，以其灵敏性高、特异性强和速度快在分子生物学等科研领域得到了广
5、泛应用。但是，由于传统的PCR技术不能准确定量，在操作过程中易受污染而使假阳性率偏高；因此，使其应用受到限制。实时荧光定量PCR技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点，已成为了分子生物学研究的重要工具。文章对实时荧光定量PCR技术的原理、检测方法、定量方法及其应用进行了综述。1.实时荧光定量PCR技术概述1.1实时荧光定量PCR技术的原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法[1]。实时荧光定量PCR是在反应体系中加入荧光基团，使产物的数量
6、与检测到的荧光强度成线性关系，从而得出产物的扩增曲线如图1。在PCR反应早期,不能将产生荧光的水平与背景明显区别,之后荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期,因此可以在指数期的某一点上检测PCR产物的量,并由此推断起始模板含量。为了准确判断样品中某基因产物的起始拷贝数，荧光定量PCR采用参数“Ct”值，Ct值也称阈值循环(thresholdcycle),指PCR循环过程中,荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数,也就是每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。研究结果表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多，
7、Ct值越小[2]。利用已知起始拷贝数的标准样品可作出标准曲线,因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数[3]。文档实用标准文案图1实时荧光定量PCR的标准扩算曲线1.2实时荧光定量PCR技术的检测方法实时荧光技术PCR是在扩增产物聚集的过程中连续检测,即“实时”检测,根据在指数扩增期的产物量来推算初始模板的拷贝数。实时荧光定量PCR包括探针类和染料类两种,探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加。染料类如SYBRGreenI则是利用与双链DNA小
