基于dna修饰纳米金和信号放大的生物传感器的研究

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1、５９学校代码ＩＭ学号或申请号２０１３２２１６１９６３＿密级么亞＿＿＿—＾＾＼＼ｋｆ专业硕±学位论文基于ＤＮＡ修饰纳米金和信号放大的生物传感器的研究作者姑名：周安伟导师化名：崔惠芳教４受专业学位為称：生物工程培养院系：生命科学学院２０１６５完成时间：年月Ａｔｈｅｓｉｓｄｋｓｅｒｔａｔｉｏｎｓｕｂｍｉｔｅｄｔｏ（）ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｏｒｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＳｔｕｄｏｆＢｉｏｓｅｎｓｏｒＢａｓｅｄｏｎＤＮＡＭｏｃ

2、ｉｉｆｉｅｄＧｏｌｄｙＮａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓａｎｄＳｉｎａｌＡｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｇｐＢｙＡｎｗｅｉＺｈｏｕＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏ．ＨｕｉｆａｎｇＣｕｉＢｉｏｌｏｇｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓＭａｙ２０１６原创性声明：所呈交的学位论文本人郑重声明，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果，。除文中己经注明引用的内容外本论文不包含任何其他个人＇或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均

3、己在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：曰期：兴年。知／／日／／学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学一位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第署名单位仍

4、然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者；？导师；Ｉ匀鄉／曰期：：／＞ｔ？月／日曰期ｙ／年月打／知《／摘要近年来，特异ＤＮＡ序列的检测在临床诊断、法医整定、食品检测、环境监测等领域中得到广泛应用，其检测的方法与精度备受科研工作者关注，传统的ＤＮＡ序列检测方法存在成本高、操作复杂等缺点。长期定植于胃病患者胃枯膜中的幽口螺旋杆菌，能引起慢性胃炎、胃溃瘍甚至胃癌等疾病，因此幽口螺旋杆菌快速准确的检测对胃部疾病的诊治具有重要意义。随着基因诊断学的发展，Ｗ及科学家们对幽口螺旋杆菌

5、基因组研巧的深入，、快速，对幽口螺旋杆菌的检测变得更加简单、准确对人体无创检测的方法越来越受到人们的欢迎一种检测幽口螺旋。在本实验组的研巧基础上，本研巧设计了杆菌基因中特有的Ｃ／Ｗ度序列的电化学ＤＮＡ生物传感器３－，将氨丙基Ｈ乙氧基珪烧（ＡＰＴＥＳ）自组装而成的分子膜和ＤＮＡ修饰的纳米金颗粒运用在传感器的组装过程中，Ｗ金属配合物作为化学指示剂，然后进行电化学检测。本研究设计的传感器中，两次利用ＤＮＡ修饰的纳米金颗粒，对信号进行双重放大。主要过程：利用组装在电极表面上ＡＰＴＥＳ的氨基与组装在纳米金颗粒上捕获探

6、针ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ）的磯酸基团之间的静电作用为，将ｃｐＤＮＡ固定在电极上ＮＡ另一，然后与範ＤＮＡ（ｔＤＮＡ）进行杂交ｔＤ端与修饰在纳米金，最后颗粒上的报告探针ＤＮＡ（ｒｐＤＮＡ）进行杂交，形成夹也结构，ｒｐＤＮＡ和发卡ＤＮＡ（ｈｐＤＮＡ）共同修饰在纳米金颗粒上。在对该传感器的研究中，合成并使用了能特异性嵌入到双链ＤＮＡ中的电化学杂交指示剂五氨２－菲－９－甲基－己（２＋２＋痛基）Ｐ比晚合钉（ＩＩ）（简称［ＲｕＮＨ３）５Ｌ）ＲｕＮＨＬ既可入在ｔＤＮＡ（］，［（３）ｓ］Ｗ嵌杂交后形成的双链中，又可Ｗ嵌入在ｈ

7、ｐＤＮＡ的双链中，嵌入完成后直接进行电ＮＨ２＋化学检测，使用［Ｒｕ（３）５Ｌ］能够有效降低检测的背景电流。扫描电子显微境（ＴＥＭ）图像和紫外吸收峰表明，本研究中合成的纳米金－颗粒的粒径大小为１３±１ｎｍ。采用ＦＡＭ巧光基团修饰的捕获探针（ＦＡＭｃｐＤＮＡ），ＡｕＮＰ－ＤＮＡ２３合成ｓｃ复合物，研究表明每个纳米金颗粒上连接了１个ｃＤＮＡｐｐ一－ＮＰｓ－ｈＤＮＡｒＤＮＡ复合物中分子；另种Ａｕｐｐ，每个纳米金颗粒上连接了１４７——＂１ｈＤＮＡ和２９个￣个ｐｒｐＤＮＡ。在最优条件下，ｔＤＮＡ的浓度在１０Ｍ１０＾

8、时，利用差分脉冲伏安法（ＤＰＶ）检测得到的峰电流（Ｉｐ）与祀ＤＮＡ浓度的对数呈－７＝Ｍ：Ｉ（〇Ａ）２１６２６＋３９，其线性回归方程ｌ．Ｌ（ＣｔＤＮＡ／）．５３５２现出良好的线性关系ｐｇ