宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导氧化应激损伤保护作用的研究

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1、分类号：R4单位代码：10752密级：公开学号：201200133宁夏医科大学硕士研究生学位论文宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导氧化应激损伤保护作用的研究EffectofTotalFlavonoidsfromLyciumbarbarumonProtectingfromtheinjuryofHighGlucoseInducedOxidativeStress学位申请人：王伟指导教师：廖国玲副教授申请学位门类级别：医学专业名称：临床检验诊断学研究方向：临床生物化学与分子生物学检验所在学院：检验学院论文完成日期：二○一五年三月宁夏医科大学研究生学院NingxiaMedical

2、UniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeEffectofTotalFlavonoidsfromLyciumbarbarumonProtectingfromtheinjuryofHighGlucoseInducedOxidativeStressStudent’sName:WangWeiSupervisor：A.PLiaoGuolingSubjectCategory:MedicineMajor:ClinicalLaboratoryDiagnosticsSpecialty:ClinicalBiologicalChe

3、mistryandMolecularBiologySchool:DepartmentofMedicalLaboratoryCompletionDate:March.2015宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明.•所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中己经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名_论文导师銘麵3於XT年《月i曰"年&月二曰

4、宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。(保密论文在解密后应遵守此规定）《月h年》月1曰宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导氧化应激损伤保护作用的研究摘要目的体外实验明确宁夏枸杞总黄酮(TFLB)对高糖（HG）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化应激损伤模型的保护作用；体内实验研究TFLB对

5、链脲佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病（DM）大鼠损伤模型的保护作用；为初步探讨TFLB对氧化应激损伤保护作用的分子机制做一些基础研究。方法1.体外培养HUVEC，采用HG诱导建立氧化应激损伤模型,实验分为正常对照组、HG损伤模型组、枸杞黄酮保护组（100、200、400mg·L-1）、阳性对照组（维生素C）。以MTT法测定细胞存活率、试剂盒测定细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）释放量及活性的变化；以酶联免疫分析测定(ELISA)法测定人血管性血友病因子(vWF)、人可溶性血栓调节蛋白(

6、sTM)、人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体（sEPCR）,观察TFLB对HG诱导血管内皮细胞损伤的保护作用。2.体内实验采用STZ诱导建立DM大鼠模型的方法，将成模的DM大鼠随机分为DM模型组和TFLB干预组。干预组大鼠TFLB灌胃4周，正常对照组及DM模型组大鼠予以等量生理盐水灌胃，每两周测空腹血糖一次。灌胃满4周，尾静脉采血测空腹血糖后，将大鼠麻醉，胸腔采血，测定血脂的变化；ELISA法测定大鼠vWF、sTM、sEPCR变化；摘取胰腺、主动脉组织进行HE染色和免疫组化，观察TFLB对DM大鼠脏器超微结构的影响及病理生理变化的改善功效。结果1.TFLB对HG诱

7、导建立HUVEC氧化应激损伤模型的保护作用（体外实验）。(1)成功建立了HG诱导的HUVEC损伤模型，确定了HG的造模浓度为40mmolL-1，损伤时间为48小时。(2)TFLB干预后，与HG损伤模型组相比较，枸杞黄I酮干预组MDA释放量明显降低、LDH释放量及活性下降，SOD的活性明显增高，NO、NOS生成量及活性明显增高，具有显著性差异（P<0.05，P<0.01），在一定浓度范围内与TFLB呈剂量依赖性关系。（3）TFLB干预后，与HG损伤模型组相比较，枸杞黄酮干预组sTM含量呈现下降趋势；各枸杞黄酮干预组的vWF、、sEPCR含量明显下降，差异具有显著

8、性（P<0.05，P<0.01）。2．