微丝相关的三丁基锡毒性机理研究

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1、分类号：____________密级：______________公开ＵＤＣ：____________单位代码：______________61011646硕士学位论文论文题目：微丝相关的三丁基锡毒性机理研究学号：_________________________1211101071姓名：_________________________涂巍巍劳动卫生与环境卫生学专业名称：_________________________学院：_________________________医学院指导教师：____________

2、_____________徐进副教授论文提交日期：2015年4月15日AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeMicrofilament-associatedtoxicityofTributyltinCandidate：TuWei-weiSupervisors：(Associate)ProfessorXuJinFacultyofMedicineNingboUniversityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINADateApri

3、l.15.2015独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。签名：___________日期：____________关于论文使用授权的声明本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保

4、留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________宁波大学硕士学位论文微丝相关的三丁基锡毒性机理研究摘要三丁基锡（tributyltin,TBT）是一种重要的有机锡化合物，凭借其特有的理化性质可用作木材防腐剂，船体涂料的防污剂，纺织业、工业水系统、木浆和造纸系统以及啤酒厂的抑菌剂等。随着其长期而广泛的大量使用，TBT及其降解副产

5、物对人类及环境所造成的危害已越来越受到人们的重视。已有大量实验研究表明TBT可对人体及动物造成严重危害，主要包括神经毒性、免疫毒性、生殖毒性以及肝毒性等。肝脏是TBT进入人体后主要的代谢器官，TBT在肝脏内可降解成DBT（二丁基锡）和MDT（一丁基锡），并可产生明显的肝毒性。本研究选用人来源的正常肝细胞系HL7702细胞作为研究对象，探讨TBT损伤肝细胞的分子机制。细胞骨架在细胞的生命活动中发挥着十分重要的作用，例如推动细胞运动、物质运输、建立和维持细胞形态、参与细胞分裂和信号转导等功能。作为细胞骨架的重要组成成分，

6、微丝在此过程中起着举足轻重的作用。本研究首先明确TBT对微丝网络以及微丝相关蛋白表达和/或磷酸化的影响，进而探索TBT破坏细胞骨架的信号通路，以期最终明确微丝相关的信号通路在TBT诱导肝细胞损伤中的分子机制。主要研究方法：1.MTT法检测细胞增殖活力，以0、2、4、6、8、10μMTBT处理细胞1、2、4h后，对细胞增殖情况进行检测，根据结果选取后续染毒时间为2h，浓度从上；2.免疫荧光法检测细胞微丝结构，用荧光燃料标记的鬼笔环肽对细胞进行染色后，在共聚焦显微镜下观察细胞微丝结构并拍照；3.Western-Blot法

7、检测细胞微丝相关蛋白表达和/或磷酸化水平，以及MAPK信号通路的激活状态。4.MAPK抑制试验，以JNK、ERK1/2、P38特异性抑制剂对细胞进行预处理，再以10μMTBT处理细胞后，检测其相关蛋白表达水平。主要研究结果：1.TBT暴露可影响HL7702细胞的增殖。随着TBT染毒浓度的增加，细胞I微丝相关的三丁基锡毒性机理研究增殖呈先上升后下降的趋势。2.TBT可造成HL7702细胞微丝解聚，形成点状聚集物和致密束。3.TBT暴露可导致HL7702细胞中VASP的表达水平下降，而不改变其他微丝相关蛋白（Arp2/3

8、、Ezrin、Cofilin）的表达水平。并且p-VASP（239）、p-VASP（157）在高浓度组表达量上调，而p-Cofilin则在2、8、10μM组表达量均下降。4.TBT暴露可激活HL7702细胞中MAPK信号通路。JNK、ERK1/2及P38的表达水平并没有改变，但P-JNK和P-ERK1/2在高浓度时表达水平明显上升。5.JNK抑