仿肝板结构肝组织三维培养技术的研究

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1、分类号密级ＵＤＣ编号讀＾藻抑入嫁硕壬学位论文仿肝扳结拘肝组巧Ｈ维墙养技术的研究ｔ－ｄＡｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｈｒｅｅｉｍｅｎｔｉｏｎａｌｃｕｌｔｕｒｅｔｅｃｈｎｉｕｅｏｆｌｉｖｅｒｑｔｉ扭ｕｅｍｉｍｉｃｋｉｎｇｔｈｅｈｅａｔｉｃｌａ化ｓ化ｕｃｔｕｒｅｐｐ店，＾受志栋导师巧名宙巧巧授专业名巧珠科学（普外）培养类型专业型论文提交日巧２０巧年３月２０曰南方医科大学２０１２级硕壬学位论文仿肝板结构

2、肝组织Ｈ维培养技术的硏究Ａ－ｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅ化ｒｅｅｄｉｍｅｎｔｉｏｎａｌＣ山ｈｉｒｅｔ：ｅｃｈｎｉｕｅｏｆｑｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｍｉｍｉｃｋｉｎｇｔｈｅｈｅａｔｉｃｌａｔｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｐｐ课题来源：国家寫技术研究发展计划（８６３计划），新型生物人工肝脏的产业化开发与转化研究（编号：２〇ｌ２ＡＡ０２０５０５）；国家自然科学基金，仿肝板结构肝组织王维培养恢复并维持肝细胞板性的机制（编号；８１４７０８７５）；广东墙中国科学院全面战略合作项目研究，肝细

3、王厂关键设备与核＇。胞技术研发（编号：２０１１Ｂ０９０３０００１５）南方医；科大学交叉学科创新团队培育计划项目，肝功能衰竭普代治巧相关肝组织工程生物材料和关键技术研发学位申请人ｔ志栋导师姓為高毅专业為称外科学（普外）培养类型专业型培养层次硕壬研究生所在学院南方医科大学珠江医院合辩委巧会主席汪谦教授答辩委员会委賓简志祥教授许瑞表教授敍晓短教授薛平教授２０１５年３月２０日广州硕去学位论文仿肝板结构肝组织Ｈ维培养技术的研究硕壬研究生：贾

4、志栋指导教师：窩毅摘要研究背景：肝衰竭是临床常见的严重肝病症候群，病死率高达６０％Ｗ上，虽然肝移植是目前治疗肝衰竭的理想方法，但供体肝来源的严重缺乏和移植排斥等问题限制了其广泛开展临床应用。生物人工肝是目前肝衰竭患者最有希望获得较好疗效的体一外治疗手段之，它不仅为折衰竭患者等待肝移植提供了过渡时间，并且还为可逆性肝衰竭患者恢复其肝功能，从而为避免肝移植提供了可能。目前生物人工肝研究的关键问题之一就是如何利用生物反应器在肝细胞体外培养中长时间维持肝细胞表型和分化功能一。体外培养细胞

5、功能改善的个重要原则就是模拟体内细胞环境，由此，众多研究学者提出体外肝细胞兰维培养是解决上述问题的有效途径。目前，国内外基于生物人工折生物反应器肝细胞三錐培养及其他能为之提供思路的体外肝细胞Ｈ维培养及肝组织构建的研究非常多，如中空纤维Ｈ维培养、微载体Ｈ维培养、球形聚集Ｈ维培养、Ｃｅｌｌｓｈｅｅｔｓ王维培养、快速成型Ｈ维培养等，但相关研究存在共性缺陷：即都只是让肝细胞实现了在兰维生长环境下生长培养，在肝细胞与非实质细胞共培养、肝细胞形成微结构的有序仿生排列、细胞与细胞、细胞与细胞基质间相

6、互作用等肝细胞极性建立机制上都都存在诸多问题没有解决，而且肝细胞功能活力也无法与肝细胞在体相比较。由于肝脏本身就是一个极佳的肝细胞培养反应器，生长于肝脏中的肝细胞不仅达到了数量和密度上的要求，而且呈有序极性肝板排列。研究表明，肝细胞极性是肝脏独恃生理功能的基础。ＩＩ摘要鉴于上述巧细胞极性与功能的密切关系，仿生肝脏结构的Ｈ维培养模式有望成为解决上述问题的有效途径。而且体外肝细胞Ｈ维培养设计只有最大程度地接＂＂＂＂近正常肝脏内肝细胞微环境及结构，能够仿生肝小叶、肝板，同时，将这

7、一理念与生物人工肝生物反应器结合工程化设计，实现生物反应器的仿生组织，才能最大程度维持肝细胞活力功能、分化表型。研究目的：本实验研究正是基于微流控巧片Ｈ维培养技术，通过借鉴肝细胞在肝脏的极、，性肝板排列，Ｗ及其与非实质细胞细胞外基质相互作用的仿生学原理提出仿肝板结构肝组织Ｈ维培养技术研究课题，认为仿肝板结构Ｈ维培养有助于重建和维持巧细胞极性从而使肝细胞在体外培养中具备更接近于体内细胞的表型和分。化功能本项目拟利用微流控芯片技术在体外构建仿肝板结构肝组织，通过对这种培养模式下肝细胞功能进

8、行测定并与其他体外培养模式相比较，期得到新的适于生物人工巧应用的体外肝细胞培养模式Ｗ及新型生物反应器，为生物人工一肝、肝组织工程、细胞移植治疗、肝脏病理生理等进步研究奠定基础。实验方法：１、设升、制作微流控忘片；经过前期大量文献调研、反复设计、验证，确定巧片的制作工艺为传统软光二甲娃ＰＤＭＳ）刻和再铸模技术