北苍术多糖的提取、性质及抗肿瘤活性研究

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1、分类号：R93学校代码：10062密级：学号：2012602189硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：北苍术多糖的提取、性质及抗肿瘤活性研究TITLEResearchesontheextractiontechnology,propertyandanti-tumoractivityofpolysaccharidesfromAtractylodesChinensis一级学科：药学二级学科：药学论文作者：许静指导教师：周晶教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R93学校代码：10062密级：学号：2012602189

2、学位类别：科学学位专业学位学科门类：理学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：北苍术多糖的提取、性质及抗肿瘤活性研究TITLEResearchesontheextractiontechnology,propertyandanti-tumoractivityofpolysaccharidesfromAtractylodesChinensis一级学科：药学二级学科：药学论文作者：许静指导教师：周晶教授导师组成员：董彩霞讲师天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独

3、立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保

4、密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：本文对北苍术多糖的提取、分离纯化工艺进行了优选，并对其单糖组成、抗肿瘤活性进行了初步探测。研究了纯化后的北苍术多糖的部分物理化学性质，分子量，糖醛酸含量、单糖组成及其连接方式，为北苍术多糖的规模化生产及临床应用提供了实验依据。方法：1.以北苍术多糖的含量和纯度为指标考察了半纤维素酶、纤维素酶、果胶酶及其复合酶法辅助超声提取对北苍术多糖提取率的影响，优选出最佳的酶组合。利用正交试验考察酶解温度、酶解时间、酶解pH及料液比对

5、北苍术多糖含量的影响，优选出最佳酶解工艺。2.以北苍术多糖损失率，脱蛋白率为指标，考察Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶酶解-三氯乙酸法及三氯乙酸-正丁醇法对北苍术多糖脱蛋白的影响。通过DEAE-SepharoseFastFlow柱层析和Sephadex-150凝胶柱层析进行分离纯化，得到北苍术精制多糖。3.通过间羟基连苯法测定糖醛酸的含量，并通过红外光谱（IR），凝胶渗透色谱，气质联用（GC-MS）对所得北苍术精制多糖进行了性质、分子量和组成分析的研究。并采用MTT法测定北苍术多糖对卵巢癌细胞株Skov3细胞增殖的抑制作用，台盼蓝法测定北苍

6、术多糖对Hela细胞、肝癌细胞株hepg2及7721的影响。结果：1.酶法辅助超声提取北苍术多糖的最佳酶解组合为纤维素酶与果胶酶（比例为1:1），最佳酶解工艺为酶用量为药材的1.2%（g/g），在pH5、50℃条件下酶解50min，在此条件下，北苍术多糖的提取率是32.29％，远高于不酶解的对照组（高出48.66%）。DEAE-SepharoseFastFlow柱层析法及SephadexG-150凝胶柱层析法分离均得到一个单一组分，经苯酚-浓硫酸法测定其纯度达92.68%。2.实验所得北苍术精制多糖为均一组分，白色粉末，易溶于水，其多糖含量为9

7、2.68%，蛋白质含量为0.8%，粗多糖和精制多糖糖醛酸含量分别为4.36%和4.07%，分子量为11171Da。红外光谱显示出多糖的特征峰。GC-MS测定其仅有果糖组成，并以2→1方式连接。I天津医科大学硕士学位论文3.北苍术多糖对卵巢癌细胞株skov3、人宫颈癌Hela细胞、肝癌细胞株hepg2及7721增殖均有明显的抑制作用，尤其是对肝癌细胞株hepg2增殖的抑制率达87.40%。结论：在本实验研究中，采用不同的酶对北苍术药材进行酶解后以超声提取北苍术多糖，以多糖的含量和纯度为指标，进行酶解北苍术工艺的初探。经过筛选，选定纤维素酶与果胶酶

8、（比例为1:1）为北苍术的酶解方法。并以该方法辅助超声提取北苍术多糖，考察了酶解温度，酶解时间、酶解pH及料液比对北苍术多糖含量的影响。在此条件下，北