人碱性成纤维生长因子对人脐带间充质干细胞增殖能力及多向分化潜能的影响

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1、人碱性成纤维生长因子（bFGF）基因转染对人脐带间充干细胞（hUC-MSC）增殖能力及多向分化潜能的影响EffectsofBasicFibroblastGrowthFactoronHumanUmbilicalCordmesenchymalstemcellsproliferationandmultilineagedifferentiationpotentialinvitro作者姓名：商圣涛专业名称:临床医学指导教师：王岩副教授学位类别：临床医学硕士答辩日期：2015年5月26日中文摘要目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(b

2、FGF)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外培养增殖能力及多向分化潜能的影响方法:贴壁培养法培养hUC-MSCs后，应用流式细胞术分析其表面相对特异性标志物(CD90,CD105，CD73等)，初步证实其为间充质干细胞；培养并诱导P2代hUC-MSCs向成脂、成软骨及成骨的方向分化，以进一步鉴定其为间充质干细胞，且具有多向分化潜能。确定bFGF促增殖作用：分为实验组和对照组，实验组添加bFGF于DMED/F12培养液中，对照组使用DMED/F12常规培养液；同时对照观察加入不同浓度的bFGF对hUC-MSCs增

3、殖的影响；MTT法测定hUC-MSCs的增殖能力，确定bFGF促增殖作用最适浓度为30μg/L。结果:培养的细胞通过流式细胞术检测CD90、CD105、CD73和CD166为阳性表达，而不表达CD34、CD45和HLA-DR，说明具有间充质干细胞的表型特征。油红O染色和茜素红染色均呈阳性，说明具有向成脂、成骨方向分化能力。MTT法分析生长曲线提示bFGF具有显著促进hUC-MSCs的增殖作用（其最适浓度为30μg/L）。绘制hUC-MSCs生长曲线可见诱导后的hUC-MSCs连续培养7天可见细胞增殖趋势，接种后从第二天

4、起实验组细胞增殖活跃，第3天达到增殖高峰，第4-5天各组细胞增殖处于平台期。结论:hUC-MSCs具有良好的多向分化潜能，bFGF可促进hUC-MSCs增殖并增强hUC-MSCs的多向分化潜能，为后续大宗实验奠定了基础和提供充足优良的hUC-MSCs。关键词:碱性成纤维细胞生长因子、人脐带间充质干细胞、细胞增殖、多向分化。IAbstractObjective:Toobservetheeffectofbasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)onhumanumbilicalcordmesenchy

5、malstemcells(hUC-MSCs)proliferationandmultilineagedifferentiationpotentialinvitro.Methods:Theadherentculturemethod.AfterhUC-MSCsofculture,analysisofitssurfaceisrelativelyspecificmarkersbyflowcytometry(CD90,CD105,CD73etc.),confirmedthatthemesenchymalstemcells;cul

6、turedandinducedP2generationhUC-MSCsintofat,boneanddifferentiationintocartilage,inordertofurtheridentificationthemesenchymalstemcells,whichhavethepotentialofmulti-directionaldifferentiation.DeterminebFGFproliferation:dividedintoexperimentalgroupandcontrolgroup,ex

7、perimentalgroupaddedbFGFinDMED/F12culturemedium,thecontrolgroupusingconventionalDMED/F12medium;andthecontroleffectofaddingdifferentconcentrationsofbFGFontheproliferationofhUC-MSCswasdeterminedbyhUC-MSCs;theproliferationabilityofMTTmethodtodeterminebFGFproliferat

8、ion,theoptimumconcentrationwas30g/L.Results:Theculturedcellswasexaminedbyflowcytometry.CD90,CD105,CD73andCD166expressionispositive,butnotexpressionofCD34,CD45andIIHLA