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时间:2019-03-20
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1、人碱性成纤维生长因子(bFGF)基因转染对人脐带间充干细胞(hUC-MSC)增殖能力及多向分化潜能的影响EffectsofBasicFibroblastGrowthFactoronHumanUmbilicalCordmesenchymalstemcellsproliferationandmultilineagedifferentiationpotentialinvitro作者姓名:商圣涛专业名称:临床医学指导教师:王岩副教授学位类别:临床医学硕士答辩日期:2015年5月26日中文摘要目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(b
2、FGF)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外培养增殖能力及多向分化潜能的影响方法:贴壁培养法培养hUC-MSCs后,应用流式细胞术分析其表面相对特异性标志物(CD90,CD105,CD73等),初步证实其为间充质干细胞;培养并诱导P2代hUC-MSCs向成脂、成软骨及成骨的方向分化,以进一步鉴定其为间充质干细胞,且具有多向分化潜能。确定bFGF促增殖作用:分为实验组和对照组,实验组添加bFGF于DMED/F12培养液中,对照组使用DMED/F12常规培养液;同时对照观察加入不同浓度的bFGF对hUC-MSCs增
3、殖的影响;MTT法测定hUC-MSCs的增殖能力,确定bFGF促增殖作用最适浓度为30μg/L。结果:培养的细胞通过流式细胞术检测CD90、CD105、CD73和CD166为阳性表达,而不表达CD34、CD45和HLA-DR,说明具有间充质干细胞的表型特征。油红O染色和茜素红染色均呈阳性,说明具有向成脂、成骨方向分化能力。MTT法分析生长曲线提示bFGF具有显著促进hUC-MSCs的增殖作用(其最适浓度为30μg/L)。绘制hUC-MSCs生长曲线可见诱导后的hUC-MSCs连续培养7天可见细胞增殖趋势,接种后从第二天
4、起实验组细胞增殖活跃,第3天达到增殖高峰,第4-5天各组细胞增殖处于平台期。结论:hUC-MSCs具有良好的多向分化潜能,bFGF可促进hUC-MSCs增殖并增强hUC-MSCs的多向分化潜能,为后续大宗实验奠定了基础和提供充足优良的hUC-MSCs。关键词:碱性成纤维细胞生长因子、人脐带间充质干细胞、细胞增殖、多向分化。IAbstractObjective:Toobservetheeffectofbasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)onhumanumbilicalcordmesenchy
5、malstemcells(hUC-MSCs)proliferationandmultilineagedifferentiationpotentialinvitro.Methods:Theadherentculturemethod.AfterhUC-MSCsofculture,analysisofitssurfaceisrelativelyspecificmarkersbyflowcytometry(CD90,CD105,CD73etc.),confirmedthatthemesenchymalstemcells;cul
6、turedandinducedP2generationhUC-MSCsintofat,boneanddifferentiationintocartilage,inordertofurtheridentificationthemesenchymalstemcells,whichhavethepotentialofmulti-directionaldifferentiation.DeterminebFGFproliferation:dividedintoexperimentalgroupandcontrolgroup,ex
7、perimentalgroupaddedbFGFinDMED/F12culturemedium,thecontrolgroupusingconventionalDMED/F12medium;andthecontroleffectofaddingdifferentconcentrationsofbFGFontheproliferationofhUC-MSCswasdeterminedbyhUC-MSCs;theproliferationabilityofMTTmethodtodeterminebFGFproliferat
8、ion,theoptimumconcentrationwas30g/L.Results:Theculturedcellswasexaminedbyflowcytometry.CD90,CD105,CD73andCD166expressionispositive,butnotexpressionofCD34,CD45andIIHLA
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