转基因棉花中外源基因cry1ac在大肠杆菌和拟南芥中表达

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1、分类号＿＿＾＿＿＿？学＾２０１３８１６１３４為请農違义邊全日制专业学位硕：±：学位论文、．，．．转基因棉花中外源基因ｃ＾ｌＡｃ在大肠杆菌节＼■．．一１？：．，＾―Ｖ和拟南介中表达Ｖ一扭為．’’一－’汽？．．－、＂、■－＇＇／心永？Ｖ：如職ｉ魏国玲與知ｎ＇’捐联Ｃｌ；：ｒ袜；Ｉ＇Ｉ，’；‘．＇－，＂；＇．．．；：．，，．说—节妒巧，？．，．這綠＇．芳－．－？？？＊？？－，ｒ‘ｒ．一＇＊＊．．，命－、一．；．＇，’（，＇：可：＇

2、二；＇记指导教师刘标研究员学位类别工程硕±Ｉ■■—专业名称生物工程．Ｖ：二—救研究方向转基因生物安全．．＾由＜：＇＇答辩日期二〇—五年六月ｉ；Ｊ：言在■巧巧女．，；■．戊．巧乂＇Ｉ武．■‘Ｖ：Ｖ／鱗、、：产、？冷＇松个、ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＨＥＣＲＹＩＡＣＧＥＮＥＦＲＯＭＴＲＡＮＳＧＥＮＩＣＣＯＴＴＯＮＩＮＥ．ＣＯＬＩＡＮＤＡＲＡＢＩＤＯＰＳＩＳＢｙＷｅｉＧｕｏｌｉｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＬｉｕＢｉａｏ乂ＴｈｅｓｉｓＳ

3、ｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙ虹ＰａｒｔｉａｌＦ山ｆｉＵｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ化ｒＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅＣｏｍｐｌｅｔｅｄｉｎＪｕｎｅ２０１５ＣｏｍｍｅｎｃｅｍｅｎｔｉｎＪｕｎｅ２０１５原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作。所取得的成果除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声

4、明的法律结果由本人承担。￣学位论文作者需亲笔签名同４參ｖ〇化年４月又日（）学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等夏制手段保存和汇编学位论文。□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口保密。＂＂（请在＾＾上方框内打Ｖ）＂０学位论文作者需亲笔签名：＾化年＾月＞日（）＃勾＾导师需亲笔签名：巧《月＾（）成

5、指目录目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＳＩｌｌ一第章文献综化１１１１．转基因植物及其研巧：现状１丄１转基因植物１１丄２转基因植物应用现状１１２转２．基因作物生物安全性评价１２１２．．转基因作物基因逃逸１２２转基因作物对非報标生物的影响３．．１．２．３转基因作物对铅标生物的抗性风险４１．３Ｂｔ杀虫蛋白基因４１．３．１Ｂｔ杀虫蛋白基因的分类５１．３．２＆杀虫蛋白的分子结构５１．３．３杀虫晶体蛋白的作用机制６１．４外源基因在大肠杆菌中髙效表达策略７１．４．１基醜造７８１．４

6、．２表达系统特性对表达的影响１．４．３外源基因与系统间的相互作用９１４４培养条件的控制１０．．１１０．５研究总体概述１１０．５．１研究目的意义１．５．２研巧内容１０１３第二章转基因棉花中外源基因在大麻杆菌中的表达、纯化及其活性研巧．．．２．１１３实验材料２丄１供试材料１３２丄２菌株和质粒１３２丄３试剂盒１４２丄４酶、试剂、引物及测序１４２丄５常用溶液配置１４２丄６－１４ＳＤＳＰＡＧＥ溶液ｉ转基因棉中外源基因在大肠杆菌和拟南芥中表达２丄７纯化缓冲液１５２１ｅｓｔｅ．１５．．

7、８Ｗｒｎｂｌｏｔ．．．．２丄９培养基１６２．２实验方法１６２．２．１植物叶片组织基因组ＤＮＡ小量提取１６２２２ＤＡＮ的ＰＣ民１６．．基因组扩增２．２．３琼脂糖凝胶中扩増片段回收１７２２４目１９－Ｔ１７．．的片段与ＰＭＤ的连接成重组质粒２．２．５大厥杆苗感受态细胞制备１８２．２．６重组质粒大肠杆菌的转化１８２ＮＡ１．２．７质粒Ｄ提取８２２８．．质粒酶切验证巧２．２．９基因序列测定与人工全基因合成巧２２１１９．