苹果砧木‘m26’病毒脱除及生根技术的研究

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1、２分类号：Ｑ学校代码：１０６９７密级：公开学号：２０１２２０８７５＾＜＾１９０２：＾ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＨ．．．；？？？士学位论文＇ＭＡＳＴＥＲＳＤＩＩＳＳＥＲＴＡＴＯＮ‘Ｍ’苹果站木２６病毒脱除及生根技术的研究学科名称：细胞生物学作者：郭早霞指导老师：王玉华副教授西北大学学位评定委员会二〇一五年西北大学学位论文知识产权声明书：本人完全了解学校有关保护知识产权的规定，即研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属于

2、西北大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。。本人允许论文被查阅和借阅学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时，本人保证一，毕业后结合学位论文研究课题再撰写的文章律注明作者单位为西北大学。保密论文待解密后适用本声明。学位论文作者签名：４：指导教师签名２＿年月丨曰年厂月曰西北大学学位论文独创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及。取得的研究成果据我所知，除了文中

3、特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西北大一学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名年月日’‘Ｍ苹果貼木２６病毒脱除及生根技术研究摘要一产量低我国是世界上苹果栽培面积最大的国家之，苹果病毒的危，但我国苹果单害及传统落后的栽培模式是造成此现象的两大主要原因。对苹果危害最严重的是苹果莲痘病毒（ＡＳＰＶ）、苹果莲沟病毒（ＡＳＧＶ）和苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬ

4、ＳＶ），这三种潜隐性病毒通常混合感染果树，，导致果实产量下降，影响果树正常生理代谢，品质变劣ＰＣＲ技术为，新梢生长量减少，失去栽培价值。本研究以基础建立三种苹果潜隐性病毒的多重ＲＴ－ＰＣＲ检测技术经抗病毒药剂脱毒和高温热处理结合二次；对检测到的病毒莲尖培养脱毒，建立高效的病毒脱除技术，培养无病毒苗。‘Ｍ’苹果主要以嫁接方式繁殖，２６因矮化效果明显、能提早接穗开花结果，是目前’‘主推的新型砧木，但Ｍ２６较难生根，在生产实践上只能作为中间站木。本研究通过植’‘Ｍ２物组织培养技术，解决６难生根的问题，结合分子生物学

5、手段，分析蔷薇科植物不‘’‘’－Ｍ２６定根形成标志基因ＡＲＲＯ】在Ｍ２６不定根形成阶段表达水平的变化，研究难生根‘’‘’生根体的机理，从根本上克服其难生根问题，结合上述研究，建立Ｍ２６高效的两步‘’一‘Ｍ’系，为Ｍ２６矮化自根站的开发迈出了可喜的步。同时建立了２６的高效离体再生体系，丰富了木本植物组织培养内容。本研究取得以下成果：１，．以编码三种苹果潜隐性病毒外壳蛋白的序列为目的基因，以《？必为内参基因建立Ｔ－ＰＣＲ病毒检测体系了高效的多重Ｒ，当ＰＣＲ反应体系的模板量为０．２４ｕｇ时，该检测体系能高效。

6、、快速稳定地检测出三种目的基因２．三种苹果潜隐性病毒的脱除：°‘Ｍ’（１）以２６为试材，将高温热处理与二次莲尖培养技术相结合，以２５Ｃ为起始温ｒ°度，每天升高ｒｃ，直至３８，３８Ｃ连续培养５０ｄ，在双目解剖镜下剥离大约５ｍｍＭ°Ｓ＋ＴＤＺ４０ｍＬ＋ＮＡＡ／Ｌ，２５４０ｄ。大小的莲尖．／０．５ｍ中Ｃ培养，接种于再生培养基ｇｇ苹果莲痘病毒（ＡＳＰＶ）、苹果莲沟病毒（ＡＳＧＶ）和苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）一二的脱除率分别为８０％、０和４０％；再以第次脱毒的植物为试材，进行次莲尖培养，三种病毒的脱除率依次增长到０％

7、、２０％和８０％。１０’‘（２）病毒抑制剂脱毒：在培养基中添加２０ｍｇ／Ｌ的利巴韦林（ｒｉｂａｖｉｒｉｎ）培养材料６０ｄ，可脱除三种苹果潜隐性病毒。ｉ３．以完整叶片为外植体，ＭＳ＋ＴＤＺ４．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ黑暗培养１５ｄ，光照培养２５ｄ，‘Ｍ’建立了苹果贴木２６的高频再生体系，不定芽的诱导率和增殖倍数分别达９８％和＋６－＋＋ＧＡ１．５８最佳继代培养基为ＭＳＢＡ０．５ｍ／ＬＩＢＡ０．１ｍ／Ｌ３０．２ｍ／Ｌ。，ｇｇｇ苹果石占木‘‘’Ｍ’２６的两步生根条件为：以幼芽（大约２ｃｍ）为材料，１／２Ｍ

8、Ｓ＋ＩＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ黑暗培养４ｄ诱导根源基形成，转入生根培养基１／２ＭＳ中光照培养２０ｄ。不定根的诱导、平均根条数和平均根长分别为１００％、６．５６ｃｉｎ１。率．１条、４，移栽成活率为００