八棱海棠种子中苹果潜隐性病毒的分布特征及脱除技术研究

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1、分类号：$661．4密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼学号：—2010—308八棱海棠种子中苹果潜隐性病毒的分布特征及脱除技术研究StudyonDistributionandEliminationofAppleLatentVirusinSeedofMalusrobustaRehd．学位申请人：乔雪华指导老师：孙建设教授邵建柱教授学科专业：果树学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一三年六月三日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含

2、其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者虢槲签字日期．嬲年∥月3日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逦j匕壅些太堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权通j壁壅些太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。一群搬榔’翩虢五玉支学位论文作者签名：柞

3、蜀华导师签名：￡

4、广泛的苹果砧木之一。长期以来，人们普遍认为实生苗不携带病毒，但在实际生产中发现有些实生苗表现出病毒病的症状。为了明确八棱海棠种子是否携带苹果潜隐性病毒，本研究以河北怀来八棱海棠种子为试材，运用多重RT-PCR技术，研究分析了八棱海棠种子的带毒情况、不同药剂对种子病毒的脱除效果以及八棱海棠种子病毒的分布特征。主要结果如下：1．以八棱海棠果实及种子为试材，研究了其适宜的总RNA提取方法。结果表明，宝生物公司生产的RNAisoPlus和RNAiso．mateforPlantTissue两种试剂结合使用适宜枝皮组织、种子及种胚高质量RNA的提取，但不适用

5、于果皮和果肉；适宜果皮和果肉总RNA提取的试剂为天根生化科技有限公司生产的RNAplant植物总RNA提取试剂。2．运用多重RT-PCR技术对随机采取的八棱海棠种子进行苹果潜隐性病毒检测，结果表明，种子携带苹果茎沟病毒和苹果褪绿叶斑病毒，总体带毒率为33％，复合侵染率为4％，苹果茎沟病毒带毒率为28％，苹果褪绿叶斑病毒带毒率为9％，但未检测出苹果茎痘病毒。3．以确定带毒母树的果实为试材，对果实的不同部位进行了潜隐性病毒检测。结果表明：不同发育期果实果皮、果肉和种子的带毒情况存在一定差异。果实膨大期的果皮果肉均携带苹果茎沟病毒和苹果褪绿叶斑病毒，但

6、只有53．33％的果皮和13．33％的果肉携带苹果茎痘病毒；成熟果实果皮果肉同时携带苹果茎沟病毒、苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎痘病毒三种潜隐性病毒；膨大期果实的种子均携带苹果茎沟病毒和苹果褪绿叶斑病毒，苹果茎痘病毒病毒带毒率为88．23％；成熟果实种子苹果茎沟病毒带毒率69．23％，苹果褪绿叶斑病毒带毒率为53．25％，苹果茎痘病毒带毒率为42．86％：对带毒母树种子的种胚进行病毒检测，种胚的苹果茎沟病毒带毒率为25％，苹果褪绿叶斑病毒带毒率为8．34％，种胚未检测到苹果茎痘病毒。4．以带毒母树上采集的种子为试材，运用RT-PCR技术对清洗浸泡的种子

7、进行苹果潜隐性病毒检测。结果表明，清洗后苹果茎沟病毒带毒率下降到64％，苹果褪绿叶斑病毒带毒率下降到26％，而未检测到苹果茎痘病毒。5．理化处理能够脱除种子携带的病毒，本研究以随机采取的八棱海棠种子为试材，采用80。C的热水、10％的磷酸三钠溶液、1％高锰酸钾溶液和2％的氢氧化钠溶液分别浸种30min，运用RT-PCR技术检测不同处理种子的带毒率，并对处理后的种子进行萌发试验。结果表明，各个处理均能不同程度地降低八棱海棠种子的带毒率。其中热水处理对脱除苹果茎沟病毒无效，高锰酸钾和磷酸三钠效果较好，脱毒效率为42％，而氢氧化钠效果最好，脱毒效率为8

8、2％。理化处理均不同程度的影响了种子的萌发力，其中热水处理的发芽率和发芽势下降幅度最大。6．为筛选脱毒率高且对种子萌发力负效应较小的处理