稻瘟菌候选效应蛋白的鉴定及功能初探

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2、：；左学，江苏扬州，Ｖ．，扬州大＾＾．．－、、刘文德研究员００８１．獻，中国农科院植保所，北京，１０＼、＇、；，申请学位级别：硕壬学科专业名称：作物遗传育种兮Ｖ论文提交日期、：２０１５年６月论文答辩日期：２０１５年５月：？…尸：一’一一Ｔ－学位授予单位２０１５年６月：扬州大学学位授予日期：？备：＾、络辩委员会主席：潘学彪教授Ｊ二气－／＇去装３：＾護片／心私在今公－＇、代拳巧獻識，公令拳－．子：心心乃辜滨：是爱六参々為９．＊－、＊一＜一？ｉ竹今＾．、－：二巧个：气＾＼记袭！一：：：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄ

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4、，２２５００９，Ｐ．民．ＣｈｉｎａＭａ２０１５ｙ李前前稻瘦菌候选效应蛋白的鉴定及功能初探Ｉ中文摘要稻瘋菌ｏ＾ｚａｅ）引起的稻痘病是水稻上最为严重的毁灭性真菌病害之一生产带来重大的经济损失一。稻痘茜作为，每年给水稻种典型模式病原真茜，对其生物学及分子生物学进行广泛深入的研究，不仅能为稻瘋病防治提供理论基础，而且可为其他病原真茜的研究提供借鉴作用。通过生物信息学分析方法，对本实验室前期筛选的在稻痘菌侵染阶段特异表达的８５１个候选分泌蛋白的亚细胞定位位置进行了预测，发现定位于叶绿体和内质网（或过氧化物酶体）上的候选分泌蛋白分别有３１和５个，

5、其中大多数预测编码假设蛋白。通过ＰＣＲ方法，成功克隆了％个候选分泌蛋白中的２０个，并分别将其与绿色和／或红色和／或黄色报告基因间融合构建瞬时表达载体。表达分析结果显示，克隆的２０个基因多数在附着胞中强表达或特异表达。在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中，有５个基因没有任何定位信一号，其余１５个则至少在个表达系统中有明确定位结果／或细胞，但多数定位于细胞核和一膜，与生物信息学预测结果间不尽致０５３８１；仅有１个基因ＭＧＧ和２个基因＿＊ＭＧＧ＿０８２７５和ＭＧＧ＿０３９４６分别定位于叶绿体和过氧化物酶体中。将顯合表达载体注射至烟草叶片中，没有发现能诱导细胞死亡的候

6、选分泌蛋白，但检测到５个基因（ＭＧＧ００１２０、ＭＧＧ０５３８１、ＭＧＧ０８２７５、ＭＧＧ０８９９４和ＭＧＧ０３９４６）可抑制由ＢＡＸ＿＿＿＿＿诱导的细胞死亡。通过酵母系统验证随机筛选的８个候选分泌蛋白的分泌功能，证实其中５个具有分泌功能、２个仍待验证、１个不具有分泌功能，表明通过生物信息学方法预测蛋白分泌性的可靠性较高。综合Ｗ上不同结果，认为ＭＧＧ００１２０、ＭＧＧ０８２７５和＿＿ＭＧＧ０３９４６这３个基因最可能是稻搞菌的候选效应子，其分别定位于细胞膜和过氧化物＿酶体中，在附着胞中强表达，具有抑制ＢＡＸ诱导的细胞死亡的功能。针对这３个候选效应子的稻癌

7、菌敲除相关载体已经构建完成，并已获得ＭＧＧ０３９４６基因敲除的稻瘋菌株。＿＂＂一一互作分子机制本研究结果将为进步鉴定稻癌菌效应子及其功能，解析稻攝菌水稻提供重要帮助，具有十分重要的意义。关键词：稻撞菌、水稻、效应子、亚细胞定位、细胞死亡？扬州大学硕壬学位论文ＡｂｓｔｒａｃｔＲｉｃｅｂｌａｓｔ，ｃａｕｓｅｄｂｙ化ｅｆｉｍｇａｌｐａｔｈｏｇｅｎ执ｅ仍ｙｚｏｅ，ｉｓｏｎｅｏｆ化ｅｍｏ巧；ｅｓｅ