池蝶蚌剂量补偿相关基因msl-1基因的分子特征及表达分析

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1、分类号：密级：UDC：学号：405611812208南昌大学硕士研究生学位论文池蝶蚌剂量补偿相关基因msl-1基因的分子特征及表达分析Molecularcharacteristicsandexpressionofmsl-1generelatedtodosagecompensationfromfreshwaterpearlmussel,Hyriopsisschlegelii陶然培养单位（院、系）：生命科学学院指导教师姓名、职称：洪一江教授申请学位的学科门类：农学学科专业名称：水产养殖论文答辩日期：2015年5月31日答辩委员会主席：____________评阅人：___

2、_____________________2015年5月31日、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）:签字日期:^(5*年（月7日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论

3、文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）:导师签名（手与一'jq签字日期：弘(厂年6月f日签字日期年（月f日论文题目本实超，1生姓名学号论文级别博士□硕士E/院/系/所韦if骨《d专业1-----

4、--------------------------------------------------------------------------------联系电话Email通信地址(邮编)：一备注：Q公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，__年__月后公开)摘要摘要本实验根据实验室转录组数据，首次运用Race-PCR及巢式PCR技术从淡水珍珠贝类池蝶蚌中获得一个剂量补偿相关基因msl-1（male-specificlethal-1）基因的cDNA全长序列，获得结果如下：1、池蝶蚌msl-1的cDNA长度是3097bp，其中3’非编码区含1586bp，5’非

5、编码区638bp，拥有一个29bp的polyA尾，并且含有多聚腺苷信号信号ATTAAA；它的开放阅读框为873bp，编码290个氨基酸；无信号肽。生物学软件预测其分子量约为33694.12Da，理论等电点为8.27；对其编码的蛋白结构域分析可知，在MSL-1的N端第166到297个氨基酸区域具有一个完整PEHE结构域，该结构域为MSL-1的特异性结构；通过二级结构预测可知，在MSL-1二级结构中，无规则卷曲和环形结构最多，其次为α螺旋结构(H)，β折叠结构(E)最少；通过N-J法绘制的系统进化树表明，池蝶蚌msl-1基因序列总体与其它动物的msl-1亲缘性较低，其中与

6、太平洋牡蛎（Crassostreagigas）msl-1的同源性最高为55%，其与太平洋牡蛎（Crassostreagigas）和莲花青螺（Lottiagigantea）共一分支。2、Q-PCR结果发现msl-1基因在取材的全部池蝶蚌组织中表达，存在明显的组织差异性，并且在雄性性腺中表达相对最高，其次是在肾脏、肠中，在心脏中表达量最低；在不同年龄池蝶蚌性腺中的mRNA表达情况：雌性当中，msl-1基因在1龄中的表达量较少，2、3龄时略有上升之后回落，但是在4龄时出现表达量显著上升现象，且是1龄的6.48倍，在5龄时又有所回落，甚至略低于一龄时的表达量；在雄性中，msl

7、-1基因在1、2龄的表达量较高且呈上升趋势，3~4龄的表达量则下降明显；至5龄时，表达量提高明显，并且远高于1、2龄的表达水平；此外，msl-1在雄性性腺中的表达量普遍高于同时期在雌性性腺中的表达量，但在4龄时雌性中的表达量却略高于雄性中的表达量。3、通过连接原核表达载体，构建pEASY-msl-1重组载体，构建成功的重组载体转入E.coli(DE3)，使用半乳糖苷酶底物类似物诱导表达MSL-1融合蛋白。MSL-1重组蛋白主要在上清中存在，根据Ni2+螯和层析法原理纯化出单一的目的蛋白。纯化后的MSL-1重组蛋白免疫新西兰兔得到多克隆抗体，经过检测抗