香蕉枯萎病菌中six2和six6基因功能分析

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1、学校代码：学号：分类号：密级綠大硕士学位论文题目香蕉枯萎病菌中和基因功能分析作者陈平亚指导教师专业微生物学时间二—？：年五月FunctionalresearchofSIX2andSIX6homologousgenefromFusariumoxysporumLsp.cubenseAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementForthetheMasterDegreeinScienceByChenPing-yaSupervisor:Major:MicrobiologySubmittedtime:M

2、ay,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：托、平丑曰期对“年月，曰学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，学校可以为存在馆际合作关系

3、兄弟高校用户提供文献传递服务和交换服务《本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海南大学。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：导师签名：日期力年月巧日日期：本人己经认寘阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年；年；口二年发布。、论文作者签名：导师签名：期：年月曰曰期摘要尖孢镰刀菌是一类农业生产中危

4、害极大的植物病原真菌，其不同的专化型能侵染香蕉、瓜类、豆科、茄科、棉等余种经济作物。香蕉枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌古巴专化型，为一种典型的土传病原真菌，其通过土壤传播的特点，使其很难防治。目前，对于香蕉枯萎病的致病机理研究得还较少，使得对其预防缺乏针对性。对香蕉枯萎病菌中相关基因的功能研究能加深我们对于其致病机理的理解，从而为该病原菌的防治提供新思路。尖孢镰刀菌在入侵香蕉根部时在木质部分泌的几个小分子量蛋白，其在木质部启动香蕉枯萎病致病力，小分子量蛋白富含半胱氨酸，分子量大小为被称为蛋白。本实验通过扩增得到香蕉枯萎病菌号生理小种的和基因左右两端片段，

5、将其克隆连接到载体中以获得同源重组片段，载体中含有绿色荧光蛋白）和潮霉素磷酸转移酶）基因作为筛选基因，再通过原生质体转化，把和转入香蕉枯萎病菌号生理小种中，获得和两个基因敲除转化子。采用对特异性引物对检测筛选阳性转化子，从而获得了带有和双标记的和缺失突变体。通过对和突变体的生物学特征观察，和基因缺失使菌落形态呈现不规则状，菌丝在显微镜下生长速率减慢，菌丝稀疏，生长速率减慢，产孢率降低，菌丝异核率增加。和突变体都能穿透玻璃纸生长，在侵染性试验中发现和突变体的孢子在香蕉苗的幼嫩根部附着量减少，孢子入侵数目降低。并且和基因缺失使其对香蕉苗的致病力降低。通过

6、质粒将敲出基因进行回复突变得到回复突变体，而回复突变体表型和致病力均可恢复至野生型。本研究对和基因的功能进行了初步的研究，鉴定了它们的功能，为进一步揭示香蕉枯萎病的致病机理奠定了基础，下一步需在此基础上进行蛋白理化性质和互作方面的研究。关键词：香蕉枯萎病菌；和因；基因敲除AbstractFusariumoxysporumisaharmfulagriculturalproductionplantpathogenicfungi,theirdifferentbiotypescaninfectbananas,melons，；目录香蕉枯萎病的分布及危害尖抱镰刀

7、菌古巴专化型的进化与多样性香蕉枯萎病致病机理研究现状尖孢镰刀菌基因国内外研究现状项目研究的目的意义材料与方法材■；科质粒和菌株试剂主要仪器主要培养基及试剂配方实验方法法提取基因组质粒的小量提取总的提取反转录反应基因的和扩增和观基因敲除载体的构建尖孢镰刀菌原生质体转化转化子的鉴定突变体菌落的形态观察突变体表型的荧光显微观察突变体的产孢量测定液体培养基中突变体的菌丝干重测定突变体异核体的观察不同碳源条件下突变体生长速率及菌落形态观察2.2.15不同氮源突变体生长速率及菌落形态观察不同温度突变体的生长及菌落形态不同突变体的生长及菌落形态渗透压胁迫对突变体生

8、长的影响外源氧胁迫对突变体生长的影响锂离子胁迫对突变体生长的影响细胞壁选择性压力对突变体生长的影响玻璃纸穿透