苹果锈果类病毒的时空分布规律及对花青苷合成和相关基因的影响

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文苹果锈果类病毒的时空分布规律及对花青苷合成和相关基因的影响学位申请人：吴然指导老师：孙建设教授邵建柱教授学科专业：果树学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年六月八日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文

2、作者签名：至然、签字日期：年6月&日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：奚鮮，导师签名:签字日期：>i5年r月2日签字円期：⑶5年&月幺日学位论文作者毕业后去向:电邮、了绿s:^工作单位：通讯地址：分类号：S661.1单位代码：10086密级：公开学号：2012221苹果锈果类病毒的时

3、空分布规律及对花青苷合成和相关基因的影响ThespatialandtemporaldistributionofAppleScarSkinviroidanditseffectsonanthocyaninsynthesisandrelatedgenes学位申请人：吴然指导老师：孙建设教授邵建柱教授学科专业：果树学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年六月八日摘要苹果锈果类病毒对果树危害极大。近年来，苹果锈果类病毒在我国苹果主产区有蔓延趋势，严重制约了我国苹果产业的健康发展。目前，对苹果锈果类病毒的发生规律知之甚少，尚无有效的防治措施。本研究利用实时荧光PCR技术建立并优化

4、了苹果锈果类病毒检测体系，并利用该体系研究苹果锈果类病毒在树体内的时空分布规律，以期为苹果锈果类病毒的检测取样和防治提供依据。同时，研究了苹果锈果类病毒对果实花青苷合成及相关基因在转录水平的影响，以期深入了解其发病机理。主要研究结果如下：1.苹果锈果类病毒实时荧光PCR方法的建立及优化建立了苹果锈果类病毒的实时荧光PCR检测方法，并对体系的特异性、灵敏性、适用性及重复性进行验证。研究表明：（1）灵敏度高，实时荧光PCR体系灵敏度高于常规RT-PCR100倍；（2）引物特异性强，能特异检测ASSVd，对苹果的其它三种病毒ACLSV、ASGV、ASPV未能检测出；（3）适用性广，可检测出花蕾、

5、叶片、根0-1-2皮及枝皮不同组织的ASSVd；（4）重复性好，重复3次测定10、10、10高、中、低3个浓度的cDNA模板，Ct值的变异系数均在误差范围内。通过设计不同的引物浓度和退火温度对本试验建立的检测方法进行优化，证明10μmol/L的引物浓度和60℃的退火温度为最优。2.苹果锈果类病毒河北分离物的克隆及序列分析本研究以表现苹果锈果类病毒症状的5个不同品种（斗南、嘎拉、华硕、中秋王、富士）的苹果果实为材料。运用RT-PCR检测确认其携带ASSVd后进行基因克隆并测序，共得到14条不同的序列。运用DNAMAN6.0分析所得的14条不同序列，同源性达98.49％，与NCBI报道的新疆、

6、北京、韩国等地的ASSVd序列高度同源，同源性达95.35％。表明ASSVd序列的变异与品种没有明显相关性。3.苹果锈果类病毒的时空分布规律本试验以携带ASSVd的富士苹果树为试材，利用建立的苹果锈果类病毒实时荧光PCR方法对其叶片、枝皮、根皮和果实进行检测，表明苹果锈果类病毒在树体内的时空分布存在差异：（1）树冠下层组织的病毒相对含量要高于树体上层对应组织的病毒含量；（2）幼嫩组织的病毒相对含量低于成熟组织；（3）高温季节的病毒含量要低于低温季节。综合试验全部采样期中ASSVd在树体内的表达量结果，我们得出12月份根皮组织中ASSVd的相对表达量为最高。因此采集该时期的根皮组织进行检测的

7、结果最为可靠。4.苹果锈果类病毒对花青苷合成及相关基因的影响（1）携带ASSVd苹果果皮和健康苹果果皮在解袋后的第0天到第14天的6个采集期，花青苷含量的变化均呈上升的趋势，但健康果皮的花青苷含量均显著高于感病果皮。（2）对花青苷合成的相关结构基因的研究中发现：解袋后第0天，健康果皮的MdCHS、MdF3H、MdDFR、MdANS、MdUFGT的相对表达量均比感病果皮高。在解袋后的第2天到第14天，除MdF3H外，其它4