自噬在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的作用及甲氨蝶呤对自噬的影响

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1、1»系考轮硕士学位论文自噬在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的作用及甲氨蝶呤对自噬的影响TheroleofAutophagyintheRheumatoidArthritisSynovialFibroblastsandtheimpactofMethotrexateonAutophagy作者：洪永桃导师：袁国华教授二〇一五年五月川北医学院硕士研究生学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体巳经发表或写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已

2、在文中以明确方式标明。除与外单位合作项0将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属川北医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：於.‘娜M:年Sfl川北医学院硕士研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅。本人授权川北医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”)：1.保密•，在—年解密后

3、适用本授权书。2.不保密口。中图分类号R593.29学校代码10634UDC610密级授予单位川北医学院自噬在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的作用及甲氨蝶呤对自噬的影响TheroleofAutophagyintheRheumatoidArthritisSynovialFibroblastsandtheimpactofMethotrexateonAutophagy作者洪永桃导师袁国华教授培养院系临床医学院授位类别学术学位授位级别硕士学科门类医学学科专业内科学研究方向自身免疫性疾病年级2012级学号201203003二○一五年五月致谢时光飞逝，转眼间三年的研究生生活

4、在这个季节即将划上一个句号。三年的求学生涯在师长和亲友的大力支持下，走得辛苦却也收获满囊。我要感谢所有给予我帮助和支持的老师们！首先，感谢我的导师袁国华教授这三年来的悉心栽培，在工作上和生活中的指点迷津。他渊博的知识和开阔的视野给了我深深地启迪，他扎实的临床看病能力、严谨的治学态度、对病患的细心耐心以及对学生的严格要求使我受益匪浅，对我的工作学习产生了深远的影响。“明师之恩，诚为过于天地，重于父母”在此我向他表示衷心的感谢！感谢川北医学院风湿血液科的全体老师们！尤其感谢刘剑平老师、谢传美老师在临床工作中给予的教导，赵臻怡老师在临床技能操作和医疗文书的书写中给予

5、的指导，感谢骨科蒲劲松老师在实验标本收集中给予的巨大帮助！感谢川北医学院附属医院风湿免疫研究所的杨明辉老师、蒋红老师、雷佳红老师、刘青松老师、夏彦辉师兄在我课题期间给予的无私帮助和指导。正是因为他们的热心，他们的无私帮助才让我的实验顺利进行，圆满结束。感谢罗雄燕、余成秀、邹倩、刘静等师姐妹的帮助！感谢我的家人默默地支持！自噬在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的作用及甲氨蝶呤对自噬的影响摘要目的：1．初步探讨体外培养的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RheumatoidArthritisSynovialFibroblasts，RASFs）中是否存在自噬现象及自噬在RA中

6、的发病机制。2．RASFs在不同浓度的甲氨蝶呤（Methotrexate，MTX）作用24小时后，分别在蛋白和基因水平测定自噬标记物微管相关蛋白1轻链3（Microtuble-associatedProtein1lightchain3，LC3）和P62的表达水平，初步探讨MTX对RASFs中自噬水平的影响。方法：分别收集膝关节置换的8例类风湿关节炎（RheumatoidArthritis，RA）患者和5例骨关节炎（Osteoarthritis，OA）患者的滑膜组织，用酶消化法消化后进行培养，加入不同浓度的MTX作用24小时后，利用蛋白质印记法（Western-

7、blotting，WB）检测LC3蛋白、P62蛋白的表达水平；实时定量反转录-聚合酶连反应（RT-qPCR）方法检测LC3mRNA、P62mRNA的表达水平；利用透射电镜检测自噬体。结果：1.WB结果：LC3蛋白、P62蛋白在RASFs和OASFs中均有表达，RASFs空白组与OASFs空白组相比，LC3蛋白表达增加、P62蛋白表达下降。在RASFs组，随着药物浓度的增加LC3蛋白表达下降、P62蛋白表达增加。2．RT-qPCR结果：LC3mRNA、P62mRNA在RASFs和OASFs中均有表达。RASFs空白组与OASFs空白组相比，LC3mRNA表达增加

8、、P62mRNA表达下降。RASFs中