生长激素受体（ghr）在牦牛不同器官组织中的分布与表达

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1、分类号密级UDC编号10733甘肃农业大学硕士学位论文生长激素受体（GHR）在牦牛不同器官组织中的分布与表达DistributionandExpressionofGrowthHormoneReceptor(GHR)inDifferentOrgansandTissuesofYak(Bosgrunneins)熊力指导教师姓名余四九教授（甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称临床兽医学研究方向动物生殖生理论文答辩日期2015年5月30日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席杨志强研究员评阅人王建林教授樊江峰副教

2、授2015年5月DistributionandExpressionofGrowthHormoneReceptor(GHR)inDifferentOrgansandTissuesofYak(Bosgrunneins)ByXiongLiSupervisor:Prof.YuSijiuADissertationSubmittedtoGansuAgriculturalUniversityforTheDegreeofMasterofClinicalVeterinaryMedicineCompletedinMay2015Co

3、mmencementinJune2015ThisworkwassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.31272616)本研究工作受国家自然科学基金项目(No.31272616)资助甘肃农业大学2012届硕士学位论文摘要本研究旨在探究生长激素受体(growthhormonereceptor,GHR)在牦牛不同器官组织中分布与表达情况。采集成年牦牛的不同器官组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和睾丸)，从各组织中提取总RNA，并通过反转录合成

4、第一链cDNA，然后根据GeneBank中家牛GHR基因序列和牦牛β-actin的基因序列设计特异性引物。采用实时荧光定量PCR测定牦牛GHR基因在不同组织中的相对表达量。同时，用4%的多聚甲醛溶液固定组织样品并制成石蜡切片，采用免疫组织化学法检测GHR蛋白在不同组织中的分布及定位，用Image-Pro-Plus6.0分析GHR阳性反应物的吸光度，并测定其积分光密度值（IOD），然后在SPSS19.0中用单因素方差法对各积分光密度值进行差异显著性分析。研究结果表明：（1）GHR基因在牦牛不同器官组织中的表达存在

5、差异性，肝脏中的相对表达量最高，分别是心脏、肾脏、睾丸、肺脏和脾脏中的3.73、4.98、5.03、8.58和10.21倍。（2）GHR蛋白在肝脏、心脏、肾脏、睾丸、肺脏和脾脏中均有分布，且阳性反应强度不等。在睾丸的曲精小管、细支气管上皮细胞、脾小结生发中心、卵母细胞和颗粒细胞的细胞质中可观察到较明显的阳性反应，细胞核反应极少；而在肝细胞、心肌细胞以及肾小管上皮细胞中，胞质和胞核均有GHR的强烈表达。（3）肝脏中GHR蛋白的表达最高，心脏、肾脏、睾丸和脾脏次之，肺脏中最少。由上述可以看出，肝脏中GHR的基因和蛋

6、白表达量均要高于心脏、脾脏、肺脏、肾脏和睾丸，推测与肝脏参与调控动物机体生长代谢的重要作用有关。本实验首次在基因水平和蛋白水平表明了GHR在牦牛不同器官组织中的表达具有差异性，为牦牛的改良和育种提供了一定的理论资料。关键词：牦牛；器官组织；生长激素受体；实时荧光定量PCR；免疫组织化学I甘肃农业大学2012届硕士学位论文SUMMARYThisstudyistoexplorethedistributionandexpressionofgrowthhormonereceptor(GHR)indifferentorg

7、ansandtissuesofyak.Samplesofdifferentorgansandtissues(heart,liver,spleen,lung,kidneyandtestis)werecollectedfromhealthyadultyaks.TotalRNAwasextractedfromthesetissuesmentionedabove,andtheRNAwasreverse-transcribedintofirst-strandcDNA,twopairsofspecificprimerswe

8、redesignedaccordingtoGHRgenesequencesofBostaurusandβ-actingenesequencesofyak.RealtimequantitativePCR(qRT-PCR)wasappliedtoanalyzetheexpressionofGHRgeneindifferenttissuesofyak.Meanwhile,thetissues