长枝木霉t6发酵条件优化、抑菌活性成分分析及其杀线作用测定

《长枝木霉t6发酵条件优化、抑菌活性成分分析及其杀线作用测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文长枝木霉T6发酵条件优化、抑菌活性成分分析及其杀线作用测定StudiesonOptimizationofFermentationConditionsandAntimicrobialActiviveCompositionsandNematicidalActivityoftheFermentationLiquidofT.longibrachiatumT6张建华指导教师姓名徐秉良教授（甘肃农业大学草业学院兰州730070）学科专业名称作物保护研究方向作物病害及其综合治理论文答辩日期2015年5月30日学位授予日期2

2、015年6月答辩委员会主席李春杰教授评阅人杨成德副教授李继平研究员2015年5月甘肃农业大学2015届硕士学位论文摘要长枝木霉（Trichodermalongibrachiatum）是生防木霉属菌物中的一种，其用于植物病害的生物防治已有报道，但具体的生防机制还未被揭示。长枝木霉T6菌株是从甘肃本地松林土中分离得到的，该菌株不仅对多种病原菌有很好的抑制作用，而且对小麦禾谷孢囊线虫（Heteroderaavenae）各个虫态均具有较强的致死作用。本文对长枝木霉T6的代谢物进行了研究，主要研究结果如下：1在单因素试验的基础上，通过响应面法对长枝木霉T6菌代谢抑菌物质的培养

3、条件进行优化。结果表明：长枝木霉T6菌代谢抑菌物质的最适碳源、氮源分别为4%甘露醇和0.6%蛋白胨。长枝木霉T6菌最优培养条件为接种量1.1%、装液量74.50mL/150mL、发酵天数4.0d。在此培养条件下的抑菌率达到96.3%，与理论预测值96.88%的绝对误差为0.58%。2在对长枝木霉T6菌培养条件优化的基础上，以11种病原菌物为供试菌，研究发酵液的抑菌活性。结果表明发酵液对苹果树腐烂病菌（Valsamail）、苹果斑点落叶病菌（Alternariamali）、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）的抑制作用最强，分别达95.97%、80.33%

4、和81.97%，对粉红单端孢（Trichotheciumroseum）、黑根霉（Rhizopusnigricans）的抑制作用最弱，分别为55.56%、52.61%。以苹果树腐烂病菌为指示菌，采用生长速率法测定发酵液在不同条件下的稳定性。稳定性试验表明：发酵液耐121℃高温，耐强酸强碱；自然光及紫外光处理对其抑菌活性无影响；在4℃及常温下可储存至少60d以上保持活性不变；长时间微波处理及Zn2+、Fe3+与Fe2+对其影响较大；氧化剂、还原剂在一定浓度内对其影响不显著。3运用萃取、薄层层析、柱层析的方法对长枝木霉T6发酵液中的抑菌活性物质进行了分离、纯化，采用生物活

5、性追踪的方法，逐步明确了发酵液中起抑菌作用的成分。试验结果表明：采用直接提取法和乙酸乙酯为萃取液的提取物对苹果树腐烂病菌和番茄灰霉病菌（Botrytiscinerea）具有最佳的抑制效果，抑制率分别为87.96%和70.04%。石油醚与乙酸乙酯比例达到10:1为最佳薄层层析展开剂。薄层层析展开后利用碘和紫外灯显色，发现共有7个点。以不同配比的石油I甘肃农业大学2015届硕士学位论文醚一乙酸乙酯作为洗脱液，经硅胶柱层析分离后得到7个组分，各组分经减压浓缩、挥干溶剂后，分别对各组分的抑菌活性进行测定。选取高活性流分CZ-4进行抑菌成分的GC-MS分析，主要抑菌成分为邻苯

6、二甲酸二异丁酯（DIBP）、油酸、邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯（MEHP）和芥酸酰胺。4以苹果树腐烂病菌、苹果斑点落叶病菌、黄瓜枯萎病菌（Fusariumoxysporum）、立枯丝核菌、粉红单端孢为供试菌，测定了活性成分DIBP、油酸、MEHP和芥酸酰胺对供试菌的抑制活性。结果表明：DIBP对立枯丝核菌、粉红单端孢有较好的抑制活性，EC50分别为64.7μl/mL、1.8μl/mL。MEHP对苹果树腐烂病菌有较好的抑制活性，EC50为40.7μg/mL，油酸、芥酸酰胺对供试病原菌几乎没有抑制活性。5研究了不同浓度长枝木霉T6发酵液对小麦禾谷孢囊线虫卵孵化的抑制作

7、用和二龄幼虫的致死作用，并且对发酵液处理后的卵及二龄幼虫的形态特征做了观察。结果表明：长枝木霉T6的发酵液对小麦禾谷孢囊线虫的卵和二龄幼虫均具有较强的致死作用。其发酵液的二倍浓缩液对卵孵化的相对抑制率为46.47%，对二龄幼虫的校正死亡率为44.45%。显微观察结果表明：长枝木霉T6菌的发酵液能使线虫的卵及二龄幼虫体腔内含物发生消解。关键词：长枝木霉T6；发酵液；稳定性；活性物质；分离纯化；线虫II甘肃农业大学2015届硕士学位论文SummaryTrichodermalongibrachiatumisonespeciesofTrichodermagenustha