刺松藻内生真菌长枝木霉的化学成分研究.pdf

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1、第26卷第4期Vo1．26，No．42014年8月Aug．2014文章编号：2095—5456(2014)04—0277—05刺松藻内生真菌长枝木霉的化学成分研究纪珍玲，马德顺，苗凤萍(1．沈阳大学生命科学与工程学院，辽宁沈阳110044；2．中国科学院烟台海岸带研究所，山东烟台264003)摘要：对烟台近岸的绿藻刺松藻来源的一株内生真菌长枝木霉的次生代谢产物进行了探索．通过硅胶柱层析、葡聚糖凝胶SephadexLH一2O柱层析、制备薄层层析和高效液相色谱等色谱分离手段，以及超导核磁共振等波谱鉴定技术，从该菌的马铃薯一葡萄糖和菊芋一葡萄糖液体培养基发酵产物中继续分离

2、并鉴定了5个化合物，包括5，8口一环氧麦角甾一6，22一二烯一3一醇(1)；麦角一7，22一二烯一3I3，5a，6f3一三醇(2)；G一谷甾醇(3)；5一羟基～3一甲基戊一2一烯酸(4)和角鲨烯(5)．化合物4和5均为首次从木霉中分离得到．抑菌活性测试结果表明化合物1～5对细菌和真菌无明显抑制作用．关键词：刺松藻；长枝木霉；内生真菌；化学成分；次生代谢产物中图分类号：Q58文献标志码：A木霉(Trichodermaspp．)是自然界中分布1材料与方法较为广泛的真菌类群，具有重要的生防作用，并且表现出丰富的次生代谢产物结构类型，包括萜类、1．1菌种与培养甾体、聚酮和生

3、物碱等l1]．海洋环境来源的木霉也长枝木霉(rf．1ongibrachiatumcf一11)是由具有丰富的次生代谓十产物，近年来对来源不同海本实验室分离自烟台近岸采集的海洋绿藻刺松藻洋环境(沉积物、海鞘、海绵、海藻等)的棘孢木霉(C．fragile)的内生丝状真菌，该真菌是经形态学(asperellum)、绿木霉(virens)、深绿木霉和克隆真菌核糖体rDNA基因ITS分子序列分(丁．atroviride)、康氏木霉(T．koningii)、长枝木析进行鉴定的，保存在中国科学院烟台海岸带研霉(longibrachiatum)、里氏木霉(T．reesei)等究所生物

4、资源实验室和中国典型培养物保藏中心的研究中获得了一系列活性新结构，包括(保藏号为CCTCCM2012141)．trichodermatides、trichodermaketones、trichoder-菌种分别以PDB培养基(葡萄糖2Og，酵母ins、sorbicillinoids、bisorbici1linoids、peptaibols、膏3g，蛋白胨5g，马铃薯浸汁200mL(200g马二肽、环肽、蒽醌和xanthone衍生物等l2J，并且铃薯煮汁)，陈海水500mL，蒸馏水300mL，琼脂部分产物表现出一定的结构特异性，例如卤代等．15g，pH=6．5～7．0

5、)和JDB(每升含菊芋块茎煮本研究组从海洋绿藻刺松藻(Codiumfragile)的汁500mL，葡萄糖10g，硝酸钠2g，陈海水500一株内生长枝木霉(longibrachiatum)的马铃mL；pH===7．0)发酵．1000mL三角烧瓶中装液薯一葡萄糖液体培养基(PDB)发酵产物中分离鉴体培养基300mL，121℃灭菌20rain后接种．两定了一种罕见的harziane二萜(6)ET]船．以菊芋种培养基分别接种15LPDB和30LJDB，自然光一葡萄糖液体培养(JDB)基再次发酵，也获得了下，室温静置培养30d．化合物6．对两种培养基发酵剩余产物的研究中，1．

6、2仪器与试剂继续分离鉴定了5种化合物1～5，其中化合物4BrukerAvanceⅢ500型核磁共振(NMR)仪；和5均为首次从木霉中分离得到．EYELAN一1001旋转蒸发仪；Agilent1260infinity收稿日期：2014—03—05基金项目：国家自然科学基金资助项目(41106137；41106136)．作者简介：纪珍玲(1986一)，女，山东海阳人，沈阳大学硕士研究生；马德顺(1962一)，男，辽宁沈阳人，沈阳大学教授，博士．278沈阳大学学报(自然科学版)第26卷高效液相色谱(HPLC)仪(EclipseSB—C18柱，9．42结果×250mm，5m

7、)；GF254薄层色谱硅胶；100～200目和200~300目柱色谱硅胶；SephadexLH一20葡2．1提取、分离与鉴定聚糖凝胶；显色剂为茴香醛一硫酸溶液；提取、柱色JDB发酵产物的菌丝体提取物为18．5g，发谱和薄层色谱有机溶剂均为分析纯；HPLC流动相酵液提取物为2O．2g．两部分提取物经薄层层析为Pall超纯水和色谱纯甲醇．(TLC)检’钡4结果类似，合并得总浸膏(38．7g)．总1．3次生代谢产物提取、分离与鉴定浸膏经硅胶柱层析，以V(石油醚)：V(乙酸乙将自然光下室温静置培养30d的菌丝体，用酯)为0：100至100：0梯度的溶液洗脱，TLC乙酸乙