水稻种质资源抗稻瘟病基因的等位基因挖掘

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4、间２０１５年３月２４日论文答辩时间２０巧年５月１９日学位巧予单位与日巧浙江师范大学答辩委员会主席论文巧阅人Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏ旦ｆｂｒＭａｓｔｅｒＡＬＬＥＬＥＭＩＮＩＮＧＯＦＲＩＣＥＢＬＡＳＴＲＥＳＩＳＴＡＮＣＥＧＥＮＥＳＩＮＲＩＣＥＧＥＲＭＰＬＡＳＭＲＥＳＯＵＲＣＥＳＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＺｈｕＸｉａｏｌｉＳｕｅｒｖｉｓｏｒ；ＴａｏＹｕｅｚｈｉ＆ＺｈｏｕＢｏｐＤｉｓｃｉｐｌｉｎｅ：ＢｏｔａｎｙＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈ

5、ｅｊｉａｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｈｕａ３２１００４，ＺｈｅｊｉａｎｇＭａｒｃｈ２０１５水稻种质资源抗稻痘病基因的等位基因挖扼摘要一稻痘病是制约水稻稳产的重要病害之。抗病品种的选育和推广是防治该病一的种有效且环保的手段，而稻癌病抗性基因的挖掘和利用又是抗病育种的基础，因此挖掘更多新的抗稻痘病基因有着重要意义。迄今已超过２５个抗稻癌病一－基因被克隆，它们中的多数都属于ＮＢＳＬＲＲ类，并且很多都是位于同基因座内的等位或复等位基因。鉴于这些已克隆的抗稻癌病基因的特点，本研究在对来自世界各地的地方品种进行抗性品

6、种的筛选后，并利用等位基因挖掘的方法对这些抗病品种所携带目标基因的等位基因进行了克隆，具体结果如下：１，．利用６个来自菲律宾的稻癌病菌生理小种对５０２份来自世界不同国家和地区的水稻地方品种进行室内接种，最终筛选出５８份高抗水稻品种，并且通过抗性评价发现彼此间具有抗谱差异。另外，比较其来源，发现达些抗病品种并不集中于某一个地区。２．根据巧２／９抗病基因座的特异性片段设计了显性引物，并利用ＰＣＲ技术筛选到２９份携带巧２／９抗病基因的阳性材料。随后用等位基因挖掘的方法从这些阳性材料中克隆获得了其中２８份材料的全长ｃＤＮＡ。通过聚类分析，获得７

7、个ｚ－不同的等位基因，其中包括巧２，巧ｆ两个已知基因和５个新的未报道的等位基２－－心５－－－因，即巧如九巧２，化２心６，巧２乂５６和巧２心。这些新的复等位基因的功能和抗谱正在分析中。３．根据巧Ａ抗病基因座的特异性片段设计了显性引物，并利用ＰＣ民技术筛选到２４份携带巧ｉｔ抗病基因的阳性材料。随后，我们利用等位基因挖掘的方法克隆获得了抗性材料Ａ４３的全长基因组ＤＮＡ，并将其氨基酸序列与几个己知ｍ等位基因的氨基酸序列进行比对分析，发现巧的ＲＧＡ４和ＲＧＡ５基因分别有４个位点和２个位点的不同于其他几个巧Ａ等位基因的氨基酸突变，