二次谐波与双光子激发荧光（shgtpef）显微成像技术诊断肾脏纤维化的系统研究

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1、分类号密级ＵＤＣ编号，咱作似緣博ｉ学位论文二次谐波与义光子澈发巧光（ＳＨＧ／ＴＰＥＦ）显化成使技术诊巧肾脏纤维化的系统研究Ｓｓｔｅｍａｔｉｃｓｔｕｄｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｂｙｇｙ－ＳｅｃｏｎｄｈａｒｍｏｎｉｃｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｗｏｈｏｔｏｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｙｇｐ刘了导师姓名赵明教巧专业名巧外科学培巧类型专业型论文提交日期２０巧年３月２０日南方医科大学２０１２

2、级博壬学位论文二次谐波和双光子激发黃光ＳＨＧ／ＴＰＥ（巧显微成像技术诊断腎脏纤维化的系统研究Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓｔ；ｕｄｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｒｅｎａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｂＳｅｃｏｎｄｇｙｈａｒｍｏｎ－ｉｃｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｗｏｈｏｔｏｎＭｉｃｒｏｓｃｏｐｐｙ课题来源：国家自然科学基金（８１１７０６９６）学位申请人刘下导师姓為赵明教授专业冶称泌尿外科（器官移植）培养类型专业型培养层次博壬研究生所在学院第二临床医学院答辩委员会主席

3、炼立中教授答辩委员会委员徐健教授林氏专教授；］王平教授＾李民教授２０１５年０３月２０日广州博壬学位论文二次谐波和双光子激发焚光（ＳＨＧ／ＴＰＥＦ）显微成像技术诊断腎赃纤维化的系统研究博壬研究生：刘了指导教师：赵明教授摘要肾间质纤维化（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ，ＩＦ）是指细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｔｒｉｘＥＣＭ）在肾小管间质中的异常沉积它是所有慢性肾脏疾病及慢性移ｍ，，植肾肾病共同病理特征。ＩＦ的发生机制复杂，涉及炎症反应

4、、免疫细胞及肾脏固有细胞调亡、氧化应激反应增强、促／抑纤维化细胞因子失衡等多个环节，目前肾纤维化发生、发展的关键环节和确切发病机制并未完全明确。研究发现，肾小球硬化及肾间质纤维化是导致肾脏疾病预后不良的重要因素，两者严重程度与肾脏功能下降密切相关，其中肾小管间质病变对肾脏疾病进展的影响较肾小球病变更为重要，能反映肾功能下降严重程度，是判断患者肾功能预后最重要的指标。因此，准确的测定肾皮质胶原纤维的含量，可Ｗ判断腎脏间质纤维。化的严重程度，对临床准确判断预后及制定诊疗方案均有重要指导意义’用来判

5、断圧的方法有多种，如Ｍａｓｓｏｎ兰色染色、天狼星红染色、免疫组化技术等，但各种方法之间的优劣还存在许多争议，目前传统的病理学检査仍然＂＂一是评判ＩＦ的金标准；，但其具有定的局限性病理染色结果的准确性不仅在标本染色时受到了染色的流程、试剂质量、标本保存的时间和技术人员水平等诸多因素影响，还在读片时受到病理医生个人经验和工作状态的影响，干扰因差一。因此国际肾脏病学专家多次呼吁希望能寻找素多，可重复性较种新的肾间质纤维化的评估方法，可对肾脏间质纤维化做出及时、准确的诊断。Ｉ摘要近年来一，非线

6、性光学显微成像技术为研究组织内胶原纤维提供了种新的方法，是目前研究的热点，己将其应用于皮肤、角膜、甲状腺、跟腫、乳房、小鼠的肾脏、人的肝脏、大鼠的肝脏等多系统组织胶原的成像，Ｗ及应用于判断肿瘤良恶性及其是否复发等方面。二次谐波技术（ＳｅｃｏｎｄｈａｒｍｏｎｉｃｅｎｅｒａｔｉｏｎＳＨＧ）ｇ，信号的强弱与生物组织中胶原的含量呈正相关，能特异性显Ｔｗｏ－ｈｏｔｏｎｅｘｃｉｔｅｄ示胶原蛋白在组织中异常沉积情况，双光子激发巧光技术（ｐｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＴＰＥＦ）可对组织细胞等结构进行显像，将两种成

7、像技术结合，图，像复合叠加，可Ｗ相互印证补充，直接展现胶原纤维及其周围的组织细胞形态。目前该项技术已广泛运用于肝纤锥化的研究中，新加坡的Ｔａｉ等将该技术和研发的计算机分析软件结合起来，建立了自动化肝纤维化定量分级系统＂＂ＦＡ￣Ｃ—Ｉｒｃｖｎｄｅｘ，可＾将人的肝穿刺标本纤维化分级由传统病理的４级细分到４０级。我校的非线性光学实验室的ＷＹ等专家通过提取ＳＨＧ／ＴＰ邸扫描的８７个肝脏标本中的生物组织胶原蛋白的特殊参数，利用特殊原理将这些参数结合起＂＂来而得到了ｑＦ化ｒｏｓｉｓ系统，并通过２５例硫代乙酷

8、胺诱导的肝纤维化大鼠标本和１６２例慢性石型肝炎患者的肝穿标本对该系统进行验证，发现ｑＦ化ｒｏｓｉｓ系统能可靠、精确地重复Ｍｅｔａｖｉｒ半定量评分系统，Ｗ及组织纤维化的评分结果。目前，国内还未有中也将该技术系统的应用于人肾脏纤维化的定量研究，在我们团队的前期研究中，现已证实了