新型希夫碱锌配合物的合成及其抗骨肿瘤活性的研究

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1、新型希夫碱锌配合物的合成及其抗骨肿瘤活性的研究Anovelschiffbasezinccoordinationcompoundinhibitstheproliferationandinducesapoptosisofbonecancer作者姓名：闫明专业名称：外科学研究方向：骨肿瘤的综合治疗与基础研究指导教师：冯超教授学位类别：医学博士培养单位：白求恩第一医院论文答辩日期：2015年12月4日授予学位日期：年月日论文评阅人：答辩委员会组成：姓名职称工作单位姓名职称工作单位盲审专家正高级东南大学主席李凡教授吉林大学基础研究院盲审专家正高级武汉大学委员岳瑛教授吉林大学第一医院盲审专家正高级中

2、山大学祝威教授吉林大学第一医院盲审专家正高级上海交通大学张劲松教授中科院沈阳金属研究所盲审专家正高级南京大学董丽松教授中科院应用化学研究所未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，巧不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发巧、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此眼）。否则。，应承担侵权的法律责任吉林大学博古学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰

3、写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中ｙ■明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名；ｉ＆／占ｊ日期：２０１５年Ｕ月４日中文摘要新型希夫碱锌配合物的合成及其抗骨肿瘤活性的研究研究背景骨肿瘤的发病率并不高，在常见肿瘤中仅占2%左右，但以我国高达13亿人口的统计基数而论，骨肿瘤的患病人群仍已达到一个不容忽视的规模。同时，一些高发肿瘤如肺癌、乳腺癌、前列腺癌等容易并发肿瘤的骨转移，因此实际上总的骨肿瘤患病人数仍然相当庞大。目前，对骨肿瘤的治疗已经从单纯的外科手术逐步向综合治疗的方向发展，尤其是新型化疗药物的出现，将骨

4、肿瘤的治疗带入了一个新的时代。早在上世纪60年代，人们就已经发现希夫碱具有抗肿瘤、抗菌、催化活性等特性，近年来有学者研制出希夫碱的铂、铜等金属配合物，并显示出强大的抗肿瘤作用。本研究中使用一种新型的希夫碱锌配合物并研究其对骨肉瘤以及常见骨转移瘤-乳腺癌的抑制作用及其抗肿的作用机制，为骨肿瘤的治疗提供一种新的可能方案。目的制备一种全新的希夫碱锌配合物并研究其对MG-63人骨肉瘤细胞及MCF-7人乳腺癌细胞的杀伤作用并对其可能机制进行研究。方法（1）新型希夫碱锌配合物的合成。（2）CCK-8法测定新型希夫碱锌配合物对体外培养的上述两种细胞的增值抑制作用；采用AnnexinV-PI双染法分析新

5、型希夫碱锌配合物诱导两种细胞的凋亡率以及对细胞周期的影响，通过显微镜观察凋亡细胞的形态。I（3）琼脂糖凝胶电泳检测DNA荧光强度；运用流式细胞仪以检测受试细胞线粒体的膜电位变化；采用WesternBlot技术检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-9、Cyt-c、Fas、Fas-L、caspa-8以及caspase-3表达变化。观察新型希夫碱锌配合物作用后裸鼠体重及体表肿瘤体积的变化。RT-PCR检测裸鼠肿瘤中相关凋亡基因的表达。结果（1）利用水杨醛、水杨酰肼、醋酸锌经水浴加热回流及沉淀最终形成新型希夫碱锌配合物；（2）CCK-8法检测细胞存活率实验结果显示，随着新型希夫碱锌

6、配合物浓度的增高以及给药时间的延长，对MG-63人骨肉瘤细胞和MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用逐渐增强。AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡率中新型希夫碱锌配合物能够诱导MG-63人骨肉瘤细胞凋亡，与对照组相比，10μmol/L、50μmol/L、70μmol/L的新型希夫碱锌配合物作用于MG-63人骨肉瘤细胞4h、24h、48h后表现出明显的诱导细胞凋亡的作用（P<0.05）。新型希夫碱锌配合物诱导MG-63人骨肉瘤细胞凋亡同样具有时间依赖性。各组中当新型希夫碱锌配合物浓度70μmol/L作用48h诱导细胞凋亡的比例最高达29.79±1.36%，且P<0.05。同样的对于MCF

7、-7人乳腺癌细胞也有相同的趋势，其中浓度70μmol/L作用48h诱导细胞凋亡的比例最高达30.29±1.77%，且P<0.05。流式细胞仪检测周期的实验中发现新型希夫碱锌配合物能够使两种肿瘤细胞的生长周期停滞与G1期，导致细胞不能由G1期向S期以及G2期移行，同时S期细胞的减少，也使肿瘤细胞的增值能力进一步降低，抑制肿瘤细胞的生长。通过倒置显微镜观察新型希夫碱锌配合物处理后的两种细胞呈现凋亡的形态学特征。（3）WesternBlo