微应变环境对组织工程化周围神经功能恢复的影响

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1、分类号：R318.01学校代码：10062密级：学号：2012602734硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：微应变环境对组织工程化周围神经功能恢复的影响TITLEAcellularnervescaffoldsimprovethefunctionalrecoverystimulatedbycyclictensilestrain(CTS)一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外科论文作者：李艳军指导教师：马信龙教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R318.01学校代码：10062密级：学号：2012602734学位类别：科学学位专

2、业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：微应变环境对组织工程化周围神经功能恢复的影响TITLEAcellularnervescaffoldsimprovethefunctionalrecoverystimulatedbycyclictensilestrain(CTS)一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外科论文作者：李艳军指导教师：马信龙教授导师组成员：宫可同孙杰孙晓雷天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用

3、的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签

4、名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：1.采用低渗联合冻干技术改良脱细胞神经支架制作方法，并在现有方法的基础上改良兔SCs分离纯化方法，将所得的神经支架和SCs于体外构建新型组织工程化周围神经。2.对体外构建的新型组织工程化周围神经给予不同程度的微应变牵张刺激，通过显微缝合技术植入周围神经缺损动物模型体内，检测其神经功能恢复情况及种子细胞在体内的分子生物学变化。方法：1.在传统化学脱细胞神经支架制作方法基础上对其进行低渗和冷冻干燥处理，并进行HE染色和扫描电镜检测，观察脱细胞是否完全。综合多种SCs分离纯化方法，通过酶消化法获得混有成纤维细胞的原代

5、SCs，利用抗代谢药物Ara-C抑制成纤维细胞的增殖，HRG1-β1修复并刺激初次纯化后的SCs，再结合差速酶法和差速贴壁法对其进一步纯化。用PKH26荧光示踪剂对所得的高纯度SCs进行标记，在体式显微镜下通过显微注射的方法于体外构建新型组织工程化周围神经，并进行HE染色观察SCs在支架内的生长状况。2．将前期体外构建的新型组织工程化周围神经置于BioDynamic生物反应舱系统内通过EF3200生物力学实验仪对其进行不同程度的周期性循环牵张微应变刺激（形变量分别为0%、5%、10%和15%）。通过显微缝合技术将不同形变量刺激后的神经支架植入坐骨神经缺损动物模型（

6、缺损长度1cm）体内修复神经缺损。分别于4周和8周通过超声观察支架在体内的形态变化和连续性，于8周时，检测动物模型术侧神经电生理和腓肠肌恢复情况，并取出神经支架进行HE、甲苯胺蓝染色，观察支架内细胞分布及髓鞘计数；S-100、GFAP及NF-200免疫荧光染色并测IOD值。病理切片后观察远端吻合口PKH26荧光示踪情况。结果：1.改良后的脱细胞神经支架HE染色及扫描电镜观察结果显示支架内部髓鞘及SCs均被完全去除，支架内部存在丰富的孔状结构。综合多种SCs分离纯化方法可以快速获得大量增殖活性好的高纯度雪旺细胞。HE染色结果显示SCs在改良支架内存活良好。2.在不同

7、微应变环境下四组不同形变量刺激的神经支架的超声长轴图像可I天津医科大学硕士学位论文见各组吻合口处神经外膜平滑延续，无断离发生，短轴图像可见神经纤维束的结构清晰完整。肌电图检测结果中10%形变量刺激后的神经支架NCV明显高于其余三种形变量组，且0%、5%、15%形变量刺激组肌电图上可见低电压、多相位的新生电位，10%形变量刺激组可见短时程、高波幅的再生电位。10%形变量组双侧腓肠肌湿重比明显高于其余三种形变量组。植入体内的支架8周时除15%形变量组结构崩解外，0%、5%、10%组支架内部及自体移植组基底层和神经纤维结构完整，呈波浪状分布。10%形变量组髓鞘数目高于0

8、%、5%组