干旱和盐胁迫中桑microrna差异表达分析

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1、学校代码：10289分类号：S884密级：公开学号：129310002江苏科技大学专业硕士学位论文（全日制专业学位）干旱和盐胁迫中桑microRNA差异表达分析研究生姓名韩韶华导师姓名李龙吴萍申请学位类别农业推广硕士学位授予单位江苏科技大学专业领域养殖论文提交日期2015年4月27日研究方向生物技术论文答辩日期2015年6月3日答辩委员会主席程嘉翎评阅人2015年6月3日分类号：S884密级：公开学号：129310002专业硕士学位论文干旱和盐胁迫中桑microRNA差异表达分析学生姓名韩韶华指导教师李龙研究员江苏科技大学二

2、零一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMAEDifferentialexpressionofmicroRNAinresponsetodroughtandsaltstressinmulberrySubmittedbyHanShaohuaSupervisedbyProfessorLiLongJiangsuUniversityofScienceandTechnologyJune,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的

3、学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以

4、采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要MicroRNAs（miRNAs）是一类长度为18～24nt的非编码内源性小RNA，广泛存在于真核生物细胞、细菌、病毒中，目前已经发现其主要通过剪切靶基因和抑制翻译调控生物的基因表达，由此影响生物的生长过程以及生物的抗生物胁迫和非生物胁迫的能力。桑树是一种重要的经济作物，但各种逆境条件和病虫害往往会对桑树的产量造成重大影响。研究桑树在胁迫条件下的miRN

5、A的表达情况，对桑树种质资源的保存和提高桑树产量有重要作用。与其他作物相比，对桑树miRNA的研究至今还处于初始阶段，对桑树的miRNA及其功能仍然了解很少。因此，开展桑树miRNA的研究对于桑树资源的开发是一项非常有意义的工作。本研究以干旱和盐处理后的桑树为实验材料，研究在干旱和盐胁迫下相关miRNA的表达情况。本研究获得以下结果：（1）对桑苗分别进行干旱和0.3mol/L的盐溶液胁迫处理。分别取干旱组、盐胁迫组，对照组不同时间的幼叶组织RNA，建立小RNA文库，采用smallRNAsolexa高通量测序技术分别对构建好的

6、三个小RNA文库进行microRNA的表达谱分析。测序结果：干旱组、盐组及对照组分别得到高质量序列13878088条、13619220条和15711033条，与桑树基因组的完美匹配度达50%以上。共分析得到保守miRNA69条，预测得到新的miRNA205条。其中，约45%的miRNA长度为24nt。（2）对测序数据分析得到的miRNA进行表达分析，发现在干旱和盐胁迫与对照组比对中，有20个miRNA差异表达显著。其中干旱组中有13个miRNA差异表达显著，上调差异表达4个，下调差异表达9个；盐胁迫组中有12个miRNA差异

7、表达显著，上调差异表达4个，下调差异表达8个。然后应用Stem-loopRT-PCR方法对这20种miRNA的表达情况进行验证，结果干旱组中，共13个miRNA差异表达，其中4个上调表达，9个下调表达。这种趋势和在测序分析的结果一致。在盐胁迫组中，共有12个差异表达，其中7个上调表达，5个下调表达。（3）利用生物信息学软件psRNAtarget以及川桑基因组，对所有测序得到的miRNA进行靶基因预测，结果预测到175个miRNA的577条靶基因。为了验证miRNA对靶基因的调控方式，找出一个miR395a，该miRNA在干旱

8、胁迫I江苏科技大学专业硕士学位论文时表达下调，并获取该miRNA的靶基因ATP硫酸化酶1基因。本研究使用realtimeRT-PCR技术对该靶基因进行荧光定量分析，结果发现在干旱胁迫处理不同时期，该基因表达量上升。证明miR395a对ATP硫酸化酶1基因的调控方式是转录后水平调控。利用RL