布鲁氏菌病、莱姆病胶体金诊断方法的建立与应用

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3、类号：密级：学号：2013408033单位代码：10759石河子大学硕士学位论文布鲁氏菌病、莱姆病胶体金诊断方法的建立与应用学位申请人钱红陈创夫教授指导教师石峰副教授申请学位类别专业硕士专业名称兽医硕士研究领域兽医技术服务所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年10月EstablishmentandapplicationofBrucellosis,LymediseasecolloidalgolddiagnosticmethodADissertationSubmittedtoShiheziUnive

4、rsityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByQianHongMasteroftheVeterinaryProfessionDissertationSupervisor:Prof.ChenChuang-fuAssociateProf.ShiFengOctober,2015课题来源1国家科技重大专项项目，项目名称：新疆地区常见疾病防治适宜技术研究与应用。项目编号：2013BAI05B052国际科技合作

5、项目，项目名称：新型布鲁氏菌疫苗制备技术的引进与应用。项目编号：2013DFA32380中文摘要布鲁氏菌病严重危害着人类的健康和畜牧业的快速发展，它是一种动物源性、自然疫源性人兽共患病。莱姆病是一种人兽共患传染性疾病，是由蜱传播的若干个不同基因种的伯氏疏螺旋体引起的疾病。目的：（1）本研究基于血清学诊断方法，建立一种快速、便捷的适用于基层诊断布鲁氏菌的免疫胶体金试纸条检测方法。（2）本研究应用免疫渗滤技术，建立一种早期鉴别莱姆病的快速诊断方法。方法：（1）提取纯化羊种布鲁氏菌强毒株16MLPS，对其纯度、

6、浓度进行鉴定后，以LPS作为包被抗原，优化完善胶体金免疫层析技术以及试纸条的制作条件，完成试纸条的组装后，对不同动物、人类血清样品进行检测，并与虎红平板凝集试验、试管凝集试验结果进行对比，分析以16MLPS作为包被抗原的试纸条的可行性。（2）使用石河子大学人兽共患病实验室构建的莱姆重组蛋白BmpA，经过纯化、浓缩，达到最佳包被浓度后，优化免疫渗滤技术的条件，使用免疫渗滤技术对疑似莱姆患者血清及未知绵羊血清进行检测，通过检测结果，探究莱姆膜脂蛋白BmpA作为包被抗原应用免疫渗滤技术，对莱姆病诊断的可行性。结

7、果：（1）免疫胶体金试纸条LPS最佳包被浓度为2.0mg/mL。440份血清样品检测结果为：试纸条与试管凝集试验的符合率为95.45%，明显高于虎红平板凝集试验与试管凝集试验的符合率（79.55%）；且试纸条的阳性检出率为84.32%，试管凝集试验阳性检出率为86.59%，相差较小。（2）重组蛋白BmpA以2.0mg/mL为制作免疫渗滤卡盒的最适包被量，用免疫渗滤卡对8份确定感染莱姆病患者的血清进行检测，检测出3份阳性血清；对30份的绵羊血清进行检测，检测出2份阳性血清，经过WB验证结果一致。结论：本研究

8、建立了以LPS作为包被抗原的布鲁氏菌病胶体金试纸条诊断方法，可用于基层对布鲁氏菌病的初步筛查；优化免疫渗滤技术，建立了以纯化的BmpA莱姆病伯氏疏螺旋体膜脂蛋白作为包被抗原的莱姆病免疫渗滤卡诊断方法。为布鲁氏菌病和莱姆病的临床诊断提供了技术支持。关键词：布鲁氏菌病;LPS;胶体金免疫层析技术;BmpA;莱姆病;免疫渗滤技术IAbstractBrucellosis,anemergingzoonoses,hasbeenshownt