基于对虾过敏原致敏模型筛选抗过敏乳酸菌及其调控机理研究

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1、密级：公开中图分类号ＴＳ２５．４：４囚全曰制□非全日制審辦讀＾善硕±学位论文（专业学位）论女题目；基于巧妳过敏原致敏模型筛选抗巧敏乳酸菌及其调控扔理硏究作者姓違：赵淑淑专业学位类别：食品工程专业学位领域：食品王程研究方向：食品质量与安全指导教师：傅玲琳提交日期：２０１５年１２月ＤｉｓｓｅｉｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄ化ＺｈｅｉａｎＧｏｎｓｈａｎｊｇｇｇＵｎ＇ｉｖｅｒｓｉｔｙｆｔ）ｒＭａｓｔｅｒｓＤｅｒｅｅｏｆ

2、ＥｎｉｎｅｅｒｉｎｇｇｇＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＡＮＤＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮＡＬＭＥＣＨＡＮＩＳＭＯＦＬＡＣＴＩＣＡＣＩＤＢＡＣＴＥＲＩＡＩＮＡＭＥＬＩＯＲＡＴＩＮＧＦＯＯＤＡＬＬＥＲＧＹＢＹＳＨＲＩＭＰＬＩＴＯＰＥＮＡＥＵＳＶＡＮＮＡＭＥＩＰＲＯＴＥＩＮＩＮＭＩＣＥ（）Ａｕ化ｏｒ：ＳｈｕｓｈｕＺｈａｏＭａｏｒ：ＦｏｏｄＥｎｉｎｅｅｒｉｎｊｇｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＬｉｎｌｉｎｇＦｕ觀Ｄｅｃ．２０１５Ｃ

3、ｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｅｊｉａｎｇＧｏｎｇｓｈａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＨａｎｇｚｈｏｕ，３１００３５，ＲＲ．Ｃｈｉｎａ浙江工商大学硕±学位论文基于对邮过敏原致敏模型筛选抗过敏乳酸菌及其调控机理研究摘要对卧等水产品食用蛋白的致敏性对食用者的安全健康存在着潜在的威胁，其致敏性的高低主要取决于食用蛋白中过敏原的种类及含量。很多研究表明，乳酸菌能够有效减缓过敏症状，调节免疫平衡。

4、然而，有许多问题尚待解决，例如抗过敏菌株的种类及其调控的机制￣一等。鉴于此，本研究拟Ｗ具有较高经济价值的特色物种南美白对邮为对象，建立腹腔注射该奸肌肉蛋白的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠过敏模型，经口灌胃５种乳酸菌，结合间接ＥＬＩＳＡ检测小鼠血清中特异性ＩｇＥ、ＩｇＧｌ－抗体水平验证过敏模型的成功建立。通过苏木素伊红／甲苯胺蓝染色Ｗ及流式细胞仪检测细胞亚群分化等手段筛选最佳抗过敏現酸菌，最后通过不同细胞与芽抱乳酸菌０９．７１２的共培养，测定细胞因子、ｍＲＮＡ表达量等的变化，研究乳酸菌调控过

5、敏反应的机制。本研究通过比较五种乳酸菌缓解邮蛋白过敏的作用，为今后筛选具有抗过敏活性的乳酸菌提供依据，同时对于研究乳酸菌的抗过敏作用机制具有参考意义。主要研究结果如下：１、采用腹腔注射致敏、经曰灌胃激发方法建立南美白对昕化肉蛋白过敏的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠动物模型。１．２ｍ昕蛋白剂量组小鼠血清中特ｇ异性Ｉ班、ＩＧｌ抗体水平增加显著且组胺含量明显高于对照组，达到ｇＩ浙江工商大学硕±学位论文－±６。了６６４．０８．５２ｎｇ／ｍＬ小肠苏木素伊红染色和甲苯胺藍染色切片的形态

6、学观察表明．，１２ｍｇ剂量组小鼠小肠中出现炎症和上皮结构的破坏，肠内肥大细胞脱颗粒，出现了严重的肠道过敏反应，证明该过敏模型己成功建立，可用于后续实验研究。２、芽抱乳酸菌０９．７１２，有效缓解小鼠过敏症状，改善肠道形态抑制腮大细胞脱颗粒和降低特异性１班、ＩＧｌ抗体水平。另外，流式ｇ测定小鼠脾淋芭细胞Ｔ细胞亚群数量结果表明，芽抱乳酸菌０９．７１２促进ＴｈＯ细胞向Ｔｈｌ细胞方向极化，纠正Ｔｈｌ／Ｔｈ２比值及增加Ｔｒｅｇ细胞数量，增加Ｔｈｌ型细胞因子分泌。上述结果表明，芽拖乳酸菌

7、０９．７口。对于过敏反应具有治疗作用，可用于后续研究３、利用流式细胞仪分选Ｔｒｅｇ细胞、Ｔｈ２细胞和Ｂ细胞，选取芽抱孰酸菌０９．７１２作为实验菌株，采用体外实验与上述细胞共培养，，邮肌肉蛋白体外刺激，ＥＬＩＳＡ法测定细胞因子含量和抗体分泌量－ｒｔＰＣＲ测定ｍＲＮＡ表达量。结果发现，芽抱郭酸菌０９．７１２抑制ＩｇＥ分泌，促进ＩｇＧ４分泌，表明乳酸菌能够促进抗体转换。另外，芽抱０９－－ｍＲＮＡｈ２．７１２増强Ｆｏｘ３、ＴＧＦ目圧１０乳酸菌ｐ［＾及表妃降低Ｔ２型Ｔｈ型细胞因子分泌，说

8、明乳酸菌能够抑制Ｔｈ免疫应答，调控ｌ／Ｔｈ２么间的免疫平衡。体外Ｐ８１５肥大细胞和芽抱孰酸菌０９．７１２共培养结，果表明，芽抱乳酸菌可直接作用于肥大细胞并抑制其脱颗粒减少组胺释放。关键词：南美白对邮Ｂａｌｂ／ｃ；Ｔ细胞；小鼠；过敏反应现酸菌ｎ浙江工商大学硕±学位论文ＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＡＮＤＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮＡＬＭＥＣＨＡＮＩＳＭＯＦＬＡＣＴＩＣＡＣＩＤ